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乳糖含量试剂盒说明书
HPLC 法 50 管/48 样
测定意义：
乳糖存在于哺乳动物的乳汁中，一分子乳糖消化可得一分子葡萄糖和一分子半乳糖。半乳糖
能促进脑苷脂类和黏多糖类的生成，对幼儿智力发育具有重要作用。
测定原理：
利用示差折光检测器测定乳糖含量。
需自备的实验用品：
液相色谱仪、示差折光检测器、低速离心机、溶剂抽滤装置、超声波清洗器、针头式过
滤器（水系，50 个，0.22μm）、滤膜（水系1 个，0.45μm）、钙柱（Carbomix Ca-NP10，7.8
×300 mm）、可调式移液器、样品瓶（50 个，2mL）、超纯水。
试剂的组成和配制：
乳糖标准品100mg×1 支，4℃保存。
实验前的准备工作：
1、将新鲜的超纯水2000 mL 用0.45 μm 的水系滤膜抽滤，以除去溶剂中的杂质，防止堵塞
色谱柱，之后用超声波清洗器超声20 分钟，以脱去溶剂中的气泡。
乳糖的提取：
1、组织的处理：按照组织质量（g）：超纯水体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取约0.2 g
组织，加入2mL 超纯水），匀浆，倒入2mLEP 管中，8000g 4℃离心10 min，取上清液，调
PH 值至5-9，水系针头式过滤器过滤后待测。
2、液体样品：取2mL 液体样品，调PH 至5-9，水系针头式过滤器过滤后待测。
标准品的配制：
在标准品试剂瓶中加入10mL 超纯水，配成10mg/mL 母液，将母液用超纯水分别稀释成10
mg/mL、8mg/mL、6 mg /mL、4 mg /mL 和2 mg /mL 的乳糖标准品溶液。水系针头式过滤器
过滤后待测。
乳糖含量测定操作步骤：
1．开启电脑、泵、检测器和自动进样器，用超纯水冲洗仪器，冲洗体积为100mL，必须保
证整个线路中充满水，不能把有机相带入色谱柱。
2．安装上色谱柱，放入柱温箱，设置流速0.2 mL/min，冲洗5min后，设置柱温为85℃，待
温度升到所需温度后，逐渐提高流速至0.6mL/min，并注意柱压不超过zui高1000psi。
3．设置进样量10 μL，流速0.6 mL/min，保留时间15min。待流速达到0.6mL/min 后，查看
基线。
4. 待基线稳定后上样检测，先加入标准品10 μL，乳糖的保留时间在10min 左右，（仪器和
检测环境不同，保留时间有差异），计算不同浓度的乳糖标准品的峰面积；加入样品10 μL，
在相应保留时间处检测乳糖的峰面积。
5. 测定结束后，调整流速为0.2mL/min，关闭柱温箱的加热系统；待柱温降到40℃以下，
停止流动相。

乳糖含量的计算：
以标准品浓度（mg/mL）为横坐标，峰面积为纵坐标计算乳糖标准曲线。将样品峰面积代入
标准曲线，计算样品乳糖含量。
注意事项：
1.CarbomixCa-NP柱的pH适用范围是5-9。如使用了超出上述pH范围的流动相，将可能对色
谱柱造成不可修复的损伤。如分析酸性样品，则务必在进样前对样品进行预处理，以保证其
pH在5-9的中性范围内，方可进样。
2.标准品的浓度范围要根据样品中乳糖浓度确定，样品中乳糖的峰面积必须落在不同浓度的
乳糖标准品的峰面积之内，该标准品稀释倍数只是一个参考。