总胆固醇（T-CHO）测试盒说明书

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总胆固醇(T-CHO)测试盒说明书  

  一、试剂组成及配制(100 管/96 样):           

  二、操作过程:

1、样本处理:①、血清(浆)：直接测定，如超过线性范围用生理盐水稀释后测定。②、培养液样本：吸取培养液，1000 转/分，离心 10 分钟，取上清测定。

[注]：一般建议细胞密度在 100 万个/ml 以上。③、组织样本：准确称取组织重量，按重量(g):体积(ml)=1:9 的比例，加入 9 倍体积的匀浆介 质，冰水浴条件下机械匀浆，2500 转/分，离心 10 分钟，取上清液待测。

[注]:1、如组织样本为非高脂样本，匀浆介质统一用磷酸盐缓冲液(0.1mol/L pH 7.4)或生理盐水进行提取。 2、如组织样本为高脂样本或部分为高脂样本，匀浆介质可统一用无水乙醇进行提取。④、细胞样本：A、细胞收集:将制备好的细胞悬液取出，1000 转/分，离心 10 分钟，弃上清液，留细胞沉 淀；用等渗缓冲液（推荐 0.1mol/L、pH7～7.4 磷酸盐缓冲液）清洗 1～2 次，同样 1000 转/分，离心 10 分钟，弃上清液，留细胞沉淀；B、细胞破碎:加入 0.2～0.3ml 的匀浆介质（推荐 0.1mol/L、pH7～7.4 磷酸盐缓冲液或生理 盐水）进行匀浆，冰水浴条件下超声破碎(功率 300W，3～5 秒/次，间隔 30 秒,重复 3～ 5 次)或手动匀浆，制备好的匀浆液不离心直接测定。也可采用裂解液裂解( 推荐 TritonX-100,1～2%,裂解 30～40 分钟)，裂解好的液体不离心直接测定。[注]：一般建议收集的细胞密度在 100 万个/ml 以上。破碎好的液体可显微镜观察细胞是否破碎* 

2、操作表： 
普通试管操作，分光光度计比色 空白管校准管样本管蒸馏水（μl）10  5.17mmol/L 校准品（μl） 10 样本（μl）  10工作液（μl）100010001000
 混匀，37℃孵育 10 分钟，波长 510nm，光径 0.5cm，蒸馏水调零，测定各管吸光度值。

 三、计算公式及举例:

1、血清等液体样本计算公式:胆固醇量=(mmol/L) 样本OD值 - 空白OD值 校准OD值 - 空白OD值 校准品浓度´(5.17mmol/L)

 a、取正常人血浆2.5μl，按操作表操作，得空白管吸光度0.012，校准管吸光度0.141，样本管 

吸光度0.103，则计算如下： 总胆固醇含量	样本OD值 - 空白OD值	校准品浓度=	´= 0.103 - 0.012 ´ 5.17 = 3.6270mmol / L

(mmol/L)校准OD值 - 空白OD值(5.17mmol/L)0.141 - 0.012

 b、取大鼠血浆2.5μl，按操作表操作，得空白管吸光度0.012，校准管吸光度0.141，样本管吸 

光度0.053，则计算如下： 总胆固醇含量	样本OD值 - 空白OD值	校准品浓度=	´= 0.053 - 0.012 ´ 5.17 = 1.6432mmol / L

(mmol/L)校准OD值 - 空白OD值(5.17mmol/L)0.141 - 0.012


2、组织、细胞计算公式: 胆固醇含量 样本OD值 - 空白OD值	校准品浓度=	´ 待测样本蛋白浓度¸

(mmol/gprot)校准OD值 - 空白OD值(5.17mmol/L)(gprot / L)

 a、取10%小鼠肝匀浆2.5μl，按操作表操作，得空白管吸光度0.012，校准管吸光度0.141，样 本管吸光度0.043，同时测得10%小鼠肝匀浆蛋白浓度为12.0121gprot/L，则计算如下： 

总胆固醇含量	样本OD值 - 空白OD值	校准品浓度=	´待测样本蛋白浓度¸

(mmol/gprot)校准OD值 - 空白OD值(5.17mmol/L)(gprot / L)

= 0.043 - 0.012 ´ 2.26 ¸12.0121 = 0.1034mmol / gprot0.141 - 0.012 

四、测定原理： 

胆固醇酯⎯ ⎯CE   ®  胆固醇+ 脂肪酸

 胆固醇CO	4+  O 2    ⎯ ⎯ ®  Δ	胆甾烯酮+ H 2 O 2

H 2 O 2   + 4 - AAP+ 3,5 - DHBS⎯ P⎯O⎯D  ® 红色醌化物+ H 2 O
生成的醌类化合物颜色的深浅与胆固醇的含量成正比，分别测定校标准管和样本管的吸光度 值，计算胆固醇的含量。 

五、产品描述： 本试剂盒采用 COD-PAP 法配制，用于体外测定总胆固醇含量。适用于各型分光光度计。

 六、性能指标：

1、试剂空白管吸光度≤0.100（0.5cm 光径）。

2、线性：0～10.34mmol/L范围内，r2＞0.995。

3、精密度：CV≤3%，批间相对极差≤5%。

4、稳定性：原装试剂盒在 2℃～8&#84

51;避光保存，有效期为 12 个月。开启后 2℃～8℃避光保存，可 稳定 3 个月。

七、注意事项：

 1、本产品仅用于科研，不得用于研究诊断，切勿服用。 

2、样品含量如超出检测范围上*，可用生理盐水稀释样本后进行测定，测定结果乘以稀释倍数。

 3、试剂防止葡萄糖、胆固醇等试剂的污染。

 4、试剂与样本量可按照比色杯体积，按照 1：100 的比例增减。        

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