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供货周期 | 现货 | 规格 | 50T |
---|---|---|---|
货号 | 15051ES60 | 应用领域 | 医疗卫生,化工,生物产业 |
产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格(元) |
FastCut MnlI快速限制性内切酶 | 15051ES50 | 50 T | 165.00 |
FastCut MnlI快速限制性内切酶
FastCut™系列内切酶是通过基因工程重组技术,可在5~15 min内精确完成DNA切割的快速限制性内切酶,适用于快速切割质粒DNA、PCR产物、基因组DNA等。FastCut™系列快速内切酶共用一种酶切缓冲液,从而简化了酶切反应体系,另外,有良好的酶活冗余度,可轻松处理底物过量或困难模板的酶切。
产品组分
组分编号 | 组分名称 | 产品规格 |
15051-A | FastCut™ MnlI | 50 μL |
15051-B | 10×FastCut™ Buffer | 1 mL |
15051-C | 10×FastCut™ Color Buffer | 1 mL |
运输与保存方法
冰袋运输。-20°C保存,有效期2年。
识别位置
5'-CCTCN7↓-3'
3'-GGAGN6↑-5'
推荐反应条件
1× FastCut™ 缓冲液;
最适37°C孵育。
失活条件
80°C孵育20 min。
注意事项
1)3 h孵育未表现星号活性,延时酶切可能出现星号活性;
2)受EcoBI甲基化影响,序列可能重叠,剪切阻断;
3)为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作;
4)本产品仅作科研用途!
质量控制
1. 功能活性检测:最适反应温度下,在20 μL反应体系中,1 μL酶能够在15 min内*消化1 μg λDNA。
2. 超长时间孵育检测:最适反应温度下,将1 μL酶与1 μg λDNA共孵育3 h,未检测到其他核酸酶污染或星号活性引起的底物非特异性降解,但延长孵育时间可能出现星号活性。
3. 酶切-连接-再酶切检测:最适反应温度下,使用1 μL酶消化底物,回收酶切产物,在22°C下使用适量T4 DNA连接酶可以将酶切产物重新连接,将连接产物再次回收后,使用相同的内切酶可以重新切开连接产物。
使用方法
1. DNA快速酶切流程
1)按如下建议的加样顺序配制体系反应液(冰上操作):
组分 | 质粒DNA | PCR产物 | 基因组DNA |
ddH2O | 15 μL | 16 μL | 30 μL |
10×FastCut™ Buffer或10×FastCut™ Color Buffer | 2 μL | 3 μL* | 5 μL |
底物DNA | 2 μL(~1 μg) | 10 μL (~0.2 μg) | 10 μL (5 μg) |
FastCut™ MnlI | 1 μL | 1 μL | 5 μL |
Total | 20 μL | 30 μL | 50 μL |
*本体系指已纯化后的PCR产物。未纯化的PCR产物具备一定的离子强度,10×FastCut TM Buffer加入量可适当减少至2 μL。若下一步进行克隆等实验,酶切前需纯化PCR产物。
2)轻柔吸打或轻弹管壁以混匀(切勿涡旋),然后瞬时离心以收集挂壁液滴。
3)37°C孵育15 min(质粒),或15~30 min(PCR 产物),或30~60 min(基因组 DNA)。
4)80°C孵育20 min即可使酶失活,停止反应(可选)。
2. 双酶切或多酶切
1)每种内切酶的用量为1 μL,并根据需要适当扩大反应体系。
2)所有内切酶的体积总和不得超过总反应体系的1/10。
3)如果选用的几种内切酶的最适反应温度不同,应先以最适温度低的酶开始酶切,再添加最适温度较高的酶,以较高的温度进行孵育。
3.质粒的扩大反应体系
组分 | 体积(20 μL) | 体积(20 μL) | 体积(50 μL) |
DNA | 1 μg | 2 μg | 5 μg |
FastCut™ MnlI | 1 μL | 2 μL | 5 μL |
10×FastCut™ Buffer或10×FastCut™ Color Buffer | 2 μL | 2 μL | 5 μL |
Total | 20 μL | 20 μL | 50 μL |
【注】:如果总反应体系大于20 μL,可使用水浴、金属浴或沙浴,并增加孵育时间。
不同DNA中的识别位点数
λDNA | ΦX174 | pBR322 | pUC57 | pUC18/19 | SV40 | M13mp18/19 | Adeno2 |
262 | 34 | 26 | 14 | 13 | 51 | 61 | 397 |
甲基化修饰影响
Dam | Dcm | CpG | EcoKI | EcoBI |
无影响 | 无影响 | 无影响 | 无影响 | 序列可能重叠 剪切阻断 |
不同反应缓冲液中的活性
反应缓冲液 | FastCut™ Buffer | Thermo Scientific FastDigest Buffer | NEB CutSmart® Buffer | Takara QuickCut™ Buffer |
活性 | 100% | 100% | 100% | 100% |
【注】:活性数据来自翌圣生物限制酶标准反应体系下的检测。
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