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供货周期 | 现货 | 规格 | 150T |
---|---|---|---|
货号 | 15049ES60 | 应用领域 | 医疗卫生,化工,生物产业 |
产品信息
产品名称
产品编号
规格
价格(元)
FastCut BglII快速限制性内切酶
15049ES60
100 T
165.00
产品描述
FastCut BglII快速限制性内切酶是通过基因工程重组技术,可在5~15 min内精确完成DNA切割的快速限制性内切酶,适用于快速切割质粒DNA、PCR产物、基因组DNA等。FastCut™系列快速内切酶共用一种酶切缓冲液,从而简化了酶切反应体系,另外,有良好的酶活冗余度,可轻松处理底物过量或困难模板的酶切。
产品组分
运输与保存方法
冰袋运输。-20°C保存,有效期2年。
识别位置
5'-A↓GATCT-3'
3'-TCTAG↑A-5'
推荐反应条件
1× FastCut™ 缓冲液;
37°C孵育。
失活条件
80°C孵育20 min。
注意事项
1)3 h孵育未表现星号活性,延时酶切可能出现星号活性;
2)受EcoBI甲基化影响,序列可能重叠,剪切受阻;
3)为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作;
4)本产品仅作科研用途!
质量控制
1. 功能活性检测:最适反应温度下,在20 μL反应体系中,1 μL酶能够在15 min内*消化1 μg λDNA。
2. 超长时间孵育检测:最适反应温度下,将1 μL酶与1 μg λDNA共孵育3 h,未检测到其他核酸酶污染或星号活性引起的底物非特异性降解,但延长孵育时间可能出现星号活性。
3. 酶切-连接-再酶切检测:最适反应温度下,使用1 μL酶消化底物,回收酶切产物,在22°C下使用适量T4 DNA连接酶可以将酶切产物重新连接,将连接产物再次回收后,使用相同的内切酶可以重新切开连接产物。
4. 非特异性内切酶活性检测:最适反应温度下,将1 μL酶与1 μg超螺旋质粒DNA共同孵育4 h后,使用琼脂糖凝胶电泳检测,质粒DNA仍然处于超螺旋状态。
5. 蓝白斑检测:将含有单一lacZα基因的载体以1 μL酶消化,重新连接后转化入大肠杆菌感受态细胞,涂布在含有对应抗生素、IPTG和X-gal的LB培养基平板上。连接正确的产物会生长出蓝色菌落,而连接错误(即DNA末端切口不完整)的产物将得到白色菌落。对于FastCut™系列限制酶而言,白色菌落比例应小于1%。
使用方法
1. DNA快速酶切流程
1)按如下建议的加样顺序配制体系反应液(冰上操作):
组分
质粒DNA
PCR产物
基因组DNA
ddH2O
15 μL
16 μL
30 μL
10×FastCut™ Buffer或10×FastCut™ Color Buffer
2 μL
3 μL*
5 μL
底物DNA
2 μL(~1 μg)
10 μL (~0.2 μg)
10 μL (5 μg)
FastCut™ BglII
1 μL
1 μL
5 μL
Total
20 μL
30 μL
50 μL
*本体系指已纯化后的PCR产物。未纯化的PCR产物具备一定的离子强度,10×FastCut TM Buffer加入量可适当减少至2 μL。若下一步进行克隆等实验,酶切前需纯化PCR产物。
2)轻柔吸打或轻弹管壁以混匀(切勿涡旋),然后瞬时离心以收集挂壁液滴。
3)37°C孵育15 min(质粒),或15~30 min(PCR 产物),或30~60 min(基因组 DNA)。
4)80°C温育 20 min 即可使酶失活,停止反应(可选)。
2. 双酶切或多酶切
1)每种内切酶的用量为1 μL,并根据需要适当扩大反应体系。
2)所有内切酶的体积总和不得超过总反应体系的1/10。
3)如果选用的几种内切酶的最适反应温度不同,应先以最适温度低的酶开始酶切,再添加最适温度较高的酶,以较高的温度进行孵育。
3.质粒的扩大反应体系
组分
体积(20 μL)
体积(20 μL)
体积(50 μL)
DNA
1 μg
2 μg
5 μg
FastCut™ BglII
1 μL
2 μL
5 μL
10×FastCut™ Buffer或10×FastCut™ Color Buffer
2 μL
2 μL
5 μL
Total
20 μL
20 μL
50 μL
【注】:如果总反应体系大于20 μL,可使用水浴、金属浴或沙浴,并增加孵育时间。
不同DNA中的识别位点数
λDNA
ΦX174
pBR322
pUC57
pUC18/19
SV40
M13mp18/19
Adeno2
6
0
0
0
0
0
1
11
甲基化修饰影响
Dam
Dcm
CpG
EcoKI
EcoBI
无影响
无影响
无影响
无影响
序列可能重叠
剪切受阻
不同反应缓冲液中的活性
反应缓冲液
FastCut™
Buffer
Thermo Scientific
FastDigest Buffer
NEB
CutSmart® Buffer
Takara
QuickCut™ Buffer
活性
100%
100%
100%
50%
【注】:活性数据来自翌圣生物限制酶标准反应体系下的检测。
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