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翌圣生物科技（上海）股份有限公司
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产品简介
| 供货周期 | 现货 | 规格 | 24T |
|---|---|---|---|
| 货号 | 12254ES | 应用领域 | 医疗卫生,化工,生物产业 |
产品介绍
产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格/元 |
Hieff NGS® MaxUp rRNA Depletion Kit (Plant) MaxUp rRNA去除试剂盒（植物） | 12254ES24 | 24 T | 18363.00 |
12254ES96 | 96 T | 53645.00 |
产品描述
Hieff NGS® MaxUp rRNA Depletion Kit (Plant)利用RNase H消化法去除植物来源总RNA中的核糖体RNA（包括细胞质18S、25S rRNA，线粒体18S、26S rRNA，叶绿体16S、23S rRNA）以保留信使RNA (mRNA)和其它非编码RNA。该试剂盒对于完整和部分降解的总RNA均具有良好的rRNA去除效果。经rRNA去除所获得的RNA样本可用于高通量测序分析mRNA和非编码RNA，可显著提高测序结果中有效数据比例，也可用于cDNA合成或其它下游应用。
适用范围
适用于多种植物来源的100 ng~1 μg 总RNA样品；适用于完整或部分降解RNA样品。
产品组分
运输与保存方法
干冰运输，-20 °C存放。效期一年。
注意事项
1. 请使用无RNase污染的耗材，并对实验区域定期进行清理，推荐使用Thermo Fisher公司的RNAZapTM 高效核酸去除喷雾去除RNA酶污染。
2. RNA样品应不含基因组DNA污染，若样品中有gDNA残留，应先进行DNase I消化并纯化后再用于本试剂盒。
3. RNA样品最大投入体积为10 μL，若样品体积较大，可先进行浓缩。
4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
5. 本产品仅作科研用途！
自备材料
1. RNA纯化磁珠：Hieff NGS® Cleaner (Cat#12602)或其他等效产品。
2. qRT-PCR质检rRNA去除效率：Hieff® qPCR SYBR Green Master Mix (No Rox) (Cat#11201)或其他等效产品。
3. 其他材料： 无水乙醇、无菌超纯水、低吸附枪头、PCR管、磁力架、PCR仪等。
操作步骤
1. 探针杂交
1.1 将探针和杂交Buffer从-20 °C 取出，解冻后颠倒混匀，置于冰上备用。
1.2 准备RNA样品：根据投入量和样品浓度，计算RNA取样体积，用Nuclease free H2O稀释至11 μL。
1.3 按照表1于200 μL PCR管中配制rRNA去除反应体系。
表1 探针杂交反应体系
名称 | 体积 (μL) |
Hybridization Buffer | 3 |
Probe Mix (Plant) | 3 |
Total RNA | 9(100 ng~1 μg) |
Total | 15 |
1.4 使用移液器轻轻吹打混匀，瞬离将反应液离心至管底。
1.5 将上述 PCR 管置于PCR仪中，按照表2所示反应程序，进行探针杂交反应。
表2 探针杂交反应程序
温度 | 时间 |
热盖105°C | On |
95 °C | 2 min |
95 °C-22 °C | 0.1 °C/s |
22 °C | 5 min |
4 °C | Hold |
2. RNase H消化
2.1将RNase H消化试剂从-20 °C取出，解冻后颠倒混匀，置于冰上备用。按照表3所示，配制RNase H消化反应体系。
表3 RNase H消化反应体系
名称 | 体积 (μL) |
RNase H Buffer | 3 |
RNase H | 2 |
上步产物 | 15 |
Total | 20 |
2.2 使用移液器轻轻吹打混匀，瞬离将反应液离心至管底。
2.3 将上述 PCR 管置于PCR仪中，设置反应程序：热盖50 °C，37 °C，30 min； 4 °C，hold，进行RNase H消化反应。
3. DNase I 消化
3.1将DNase I消化试剂从-20 °C 取出，解冻后颠倒混匀，置于冰上备用。按照表4所示，配制DNase I消化反应体系。
表4 DNase I消化反应体系
名称 | 体积 (μL) |
DNase I Buffer | 27.5 |
DNase I | 2.5 |
上一步产物 | 20 |
Total | 50 |
3.2 使用移液器轻轻吹打混匀，瞬离将反应液离心至管底。
3.3 将上述 PCR 管置于PCR仪中，设置反应程序：热盖50 °C，37 °C，30 min； 4 °C，hold，进行DNase I消化反应。
4. RNA纯化
4.1 准备工作：将 Hieff NGS® RNA Cleaner (Cat#12602)磁珠由冰箱中取出，室温平衡至少 30 min。用Nuclease free H2O配制80%乙醇。
4.2 涡旋振荡或充分颠倒磁珠以保证充分混匀。
4.3 吸取 110 μL Hieff NGS® RNA Cleaner (2.2×，Beads:DNA=2.2:1)至上一步产物中，移液器充分吹打混匀，室温孵育 5 min。
4.4 将PCR管置于磁力架中分离磁珠和液体，待溶液澄清后（约3 min），小心移除上清。
4.5 保持PCR管始终置于磁力架中，加入 200 μL Nuclease free H2O新鲜配制的80%乙醇漂洗磁珠，室温孵育 30 sec 后，小心移除上清。
4.6 重复步骤 4.5，总计漂洗两次。用 10 μL移液器吸干净残留液体。
4.7 保持 PCR 管始终置于磁力架中，室温下开盖干燥磁珠 (5~10 min)。
4.8 RNA洗脱：将PCR 管从磁力架上取下，加入 11 μL Nuclease free H2O（或使用适合下游实验的相应体积Nuclease free H2O或洗脱缓冲液），使用移液器轻轻吹打至充分混匀，室温静置 5 min。
4.9将 PCR管短暂离心并置于磁力架中静置，待溶液澄清后（约3 min），小心移取 10 μL 上清（可根据步骤4.7选择的实际洗脱体积进行相应调整）至新的Nuclease free PCR 管中。
【注】：洗脱后的样品请立即进行下游实验，或置于-80 °C存放。
案例展示
1）15种不同的植物样本，投入1μg进行RNA建库测试，rRNA的残留率如图1所示，rRNA残留率都在2%以内。
图1 不同类型植物样本，rRNA的残留率检测。
2）不同客户返样的植物样本，投入1μg进行RNA建库测试，rRNA的残留率如图2所示，rRNA残留率都在2%以内。
图2 不同客户返样植物样本，rRNA的残留率检测。
HB211122
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