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供货周期 | 现货 | 货号 | 10616ES84 |
---|---|---|---|
应用领域 | 生物产业 |
mRNA Cap 2´-O-Methyltransferase
mRNA Cap 2氧甲基转移酶
产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格(元) |
mRNA Cap 2´-O-Methyltransferase mRNA Cap 2氧甲基转移酶 | 10616ES84 | 2000 U | 652.00 |
10616ES92 | 10000 U | 2852.00 | |
10616ES97 | 50000 U | 12352.00 |
产品描述
mRNA Cap 2氧甲基转移酶(mRNA Cap 2´-O-Methyltransferase)是一种来自于牛痘病毒的重组蛋白。该酶可以在RNA的5´末端紧挨帽结构的第—个核苷酸的2´-O位置处添加一个甲基基团。该酶利用SAM作为甲基供体来甲基化加帽RNA,从而形成Cap1结构。Cap1结构能增强mRNA的翻译效率,因此可有助于改善mRNA转染和显微注射实验中的表达。该酶需要有m7GpppN即7-甲基鸟苷帽结构的RNA作为底物。
产品性质
英文名(English Name) | mRNA Cap 2´-O-Methyltransferase |
来源(Source) | 重组E.coli |
浓度(Concertation) | 50000 Units/mL |
纯度(Purity) | ≥99%(SDS-PAGE) |
比活(Specific Activity) | ≥1.6×105 U/mg |
储存缓冲液(Storage Buffer) | 20 mM Tris-HCl pH8.0,0.1mM EDTA,1mM DTT,100mM NaCl,50%(v/v)甘油,0.1%(v/v)Trion X-100 |
活性单位定义(Unit Definition) | 一单位(U)定义为:在37℃条件下1h内甲基化10pmol的80nt带帽RNA转录物所需的酶量。 |
运输和保存方法
冰袋运输。-20℃保存,有效期1年。推荐分装冻存,避免反复冻融。
使用方法
1、使用RNase-free 水将适量 Capped RNA 稀释至16μl;
2、将稀释的RNA 在65℃条件下加热处理5min,反应后冰上放置 5mi;
3、按下表(1)配置反应体系(适用于10μg以内Capped RNA的甲基化反应);
4、37℃条件下孵育1h(对与目的片段长度小于200nt RNA,可将孵育时间增加到2h);
5、10×Capping Buffer的配置如下:500mM Tris-HCl、pH8.0、50mM KCl、10mM MgCl2、10mM DTT。
表1:20μL反应体系配置
体系组分 | 20μl(Total) |
Denatured Capped RNA | 16μl |
10x Capping Reaction Buffer | 2μl |
SAM (4 mM) | 1μl |
mRNA Cap 2´-O-Methyltransferase (50 U/μl) | 1μl |
注意事项
1、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
2、用于实验反应的RNA在用之前应进行纯化处理并溶于RNase-free water且溶液中不能含任何的EDTA和盐离子;
3、反应之前推荐65℃加热5min以去除RNA的二级结构。如果转录产物的5´端结构复杂,可将时间延长至10min;
4、SAM试剂在pH 7–8,37°C条件下稳定性较差,需要现用现配。可预先计算好所需SAM的用量,在反应前将32 mM的储备液稀释成4 mM的工作液。为防止SAM降解,工作液应保存于冰上。
HB200516