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供货周期 | 现货 | 规格 | 24T |
---|---|---|---|
货号 | 12609ES24 | 应用领域 | 医疗卫生,生物产业 |
产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格(元) |
Hieff NGS® Fast-Pace DNA Fragmentation Reagent 快速片段化/末端修复/A尾添加模块 | 12609ES24 | 24 T | 1462 |
12609ES96 | 96 T | 5362 | |
12609ES98 | 1000T | - |
产品描述
Hieff NGS® Fast-Pace DNA Fragmentation Reagent快速片段化/末端修复/A尾添加模块是针对Illumina®与MGI®高通量测序平台设计的新一代酶切法建库试剂。本品采用高质量的片段化酶,摆脱了繁琐的超声过程,同时简化了操作流程,将片段化模块与末端修复/加A模块合二为一,极大的降低了建库的时间和成本。可应用于500 pg-1 μg常规动植物基因组、微生物基因组等样本,在单管内实现DNA的片段化、末端修复和A尾添加反应。反应产物无需纯化,即可使用Hieff NGS® Fast-Pace DNA Ligation Module(Cat#12607)或Hieff NGS® Ultima DNA Ligation Module(Cat#12604)进行文库构建中接头连接反应。
产品组分
组分编号 | 组分名称 | 24 T | 96 T | 1000T |
12609 | Smearase® Mix | 240 μL | 960 μL | 10mL |
运输与保存方法
冰袋运输。
-20℃保存,有效期1年。
注意事项
1)本试剂盒兼容范围为500 pg – 1 μg Input DNA。应尽可能使用A260/A280 = 1.8-2.0的高质量Input DNA。
2)若Input DNA中引入高浓度金属离子螯合剂或其他盐,可能会影响后续实验,建议将DNA稀释在ddH2O或不含EDTA的10 mM Tris Buffer (pH 7.5-8.0)中进行片段化。
3)对于常规的高质量基因组DNA,酶切时间参考表1。本试剂盒片段化偏好低,耐受各种GC含量的模板。
表1 常规基因组DNA段化时间推荐表
插入片段主峰大小 | 片段化时间 | 优化范围 |
600 bp | 5 min | 3-8 min |
350 bp | 8 min | 5-12 min |
250 bp | 10 min | 8-15 min |
200 bp | 13 min | 10-20 min |
150 bp | 20 min | 12-25 min |
【注】:以上为推荐时间,需客户在自己的实验体系中进行微调,以达到最佳效果。
4)参照片段化步骤推荐条件可将DNA酶切为所需大小,为保证优质稳定的片段化效果,片段化过程请于冰上操作。
5)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
6)本产品仅用作科研用途!
使用方法
DNA段化/末端修复/dA尾添加(DNA Fragment/End Preparation/dA-Tailing)
该步骤将基因组DNA段化,同时进行末端修复及dA尾添加。
1. 将表2中试剂解冻后,颠倒混匀,置于冰上备用。
2. 于冰上配制表2反应体系。
表2 DNA段化/末端修复/dA尾添加 PCR反应体系
名称 | 体积(μL) |
Input DNA | x |
Smearase® Mix | 10 |
ddH2O | Up to 60 μL |
3. 使用移液器轻轻吹打或振荡混匀,并短暂离心将反应液离心至管底。
4. 将上述PCR管置于PCR仪,设置表3所示反应程序,进行DNA段化,末端修复及dA尾添加反应。
表3 DNA段化/末端修复/dA尾添加 PCR反应程序
温度 | 时间 |
热盖105°C | On |
4 °C | 1 min* |
30 °C | 3-20 min** |
72 °C | 20 min |
4 °C | Hold |
【注】:*DNA段化过程为有效控制片段化效果,避免过度酶切,反应程序可预先设置4℃,待模块温度降至4℃时,将PCR管放入PCR仪即可。**对于完整的基因组DNA,酶切时间参考表1。
5. 产物如需纯化,可使用Hieff NGS® DNA Selection Beads(Cat#12601)或AMPure XP Beads(Cat#A63880)或其他等效产品。也可以直接驳接Hieff NGS® Ultima DNA Ligation Module(Cat#12604)或Hieff NGS® Fast-Pace DNA Ligation Module(Cat#12607)试剂盒,进行接头连接。详细说明请见后者的说明书。
参考实例
使用Hieff NGS® Fast-Pace DNA Fragmentation Reagent对小牛胸腺gDNA样本进行酶切,片段化结果见图1。
图1 Fast-Pace DNA Fragmentation Reagent酶切800 ng小牛胸腺gDNA样本(不同酶切时间片段化效果检测)
HB220118