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供货周期 | 现货 | 规格 | 24T |
---|---|---|---|
货号 | 12604ES24 | 应用领域 | 医疗卫生,化工,生物产业 |
产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格(元) |
Hieff NGS® Ultima DNA Ligation Module 快速DNA连接模块 | 12604ES24 | 24 T | 3263.00 |
12604ES96 | 96 T | 10863.00 | |
12604ES98 | 960T | 87663.00 |
产品描述
Hieff NGS® Ultima DNA Ligation Module是针对Illumina®与MGI®高通量测序平台文库构建专业设计的DNA连接模块,其中最大的亮点为本产品采用一款我公司自主研发的高效连接酶Fast T4 DNA ligase。本产品可在双链平末端DNA////片段或双链3´-dA DNA////片段的两端连接Illumina®与MGI®测序平台适用的DNA接头,具有连接效率高、简便、可实现自动化等优势。
本产品已与Hieff NGS® Ultima Endperp Mix(Cat#12605),2×Super Canace® II High-Fidelity Mix for Library Amplification(Cat#12621)共同用于DNA文库构建,通过Illumina®高通量平台测序验证其有效性。
本产品已与Hieff NGS® Ultima Endprep Mix(Cat#12605)、2×Ultima HF Amplification Mix for MGI®(Cat#13344)共同用于DNA文库构建,通过MGI®高通量平台测序验证其有效性。
本产品中提供的所有试剂组分,都经过严格的质量与功能验证,最高程度保障产品优异性能与批间稳定性。
产品组分
产品编号 | 组分名称 | 产品编号/规格 | ||
12604ES24 | 12604ES96 | 12604ES98 | ||
12604-A | Fast T4 DNA Ligase | 120 μL | 480 μL | 4.8 mL |
12604-B | 5×Fast Ligation Buffer | 480 μL | 2 × 960 μL | 2 × 9.6 mL |
运输与保存方法
冰袋运输。
-20℃保存,效期一年。
注意事项
1)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
2)本产品仅作科研用途!
使用方法
1. Adapter的质量和使用浓度直接影响连接效率及文库产量。Adapter用量过高可能会产生较多Adapter Dimer;用量较低可能会影响连接效率及文库产量。表1列举了使用本试剂盒,不同Input DNA量推荐的Adapter使用量。
表1 . 500 pg-1 μg Input DNA推荐的Adapter使用浓度
Input DNA | Adapter : Input DNA摩尔比 | Input DNA | Adapter : Input DNA摩尔比 |
1 μg | 10:1 | 50 ng | 100:1 |
500 ng | 20:1 | 25 ng | 200:1 |
250 ng | 40:1 | 1 ng | 200:1 |
100 ng | 100:1 | 500 pg | 400:1 |
【注】:Input DNA摩尔数(pmol)≈ Input DNA质量(ng)/ [0.66 × Input DNA平均长度(bp)]。
2. 目前主流的合并法DNA建库试剂盒,其末端修复和加A处理后一般不纯化,直接进行接头连接。本试剂盒可与主流的商业化末端修复加A体系兼容,进行接头连接。反应体系请参考如下配制,涡旋瞬离后置于20℃,反应15分钟即可。
表2 . Adapter Ligation体系
名称 | 体积(μL) |
dA-tailed DNA | 60 |
5×Fast Ligation Buffer | 20* |
Fast T4 DNA Ligase | 5 |
DNA Adapter | X** |
ddH2O | To 100 |
【注】:*对于5×Fast Ligation Buffer,请上下颠倒、振荡,充分混匀并瞬时后离心使用。
**根据自身需求加入适量的接头。
【接头添加计算举例】:当Input DNA为100 ng,Input DNA长度为300 bp时,接头应该添加多少?
第一步,计算Input DNA摩尔数。公式:Input DNA摩尔数(pmol)≈ Input DNA质量(ng)/ [0.66 × Input DNA平均长度(bp)];
Input DNA 摩尔数(pmol)=100÷(0.66×300)=0.5 pmol;
第二步,计算接头添加摩尔数。根据注意事项三表2查询接头添加比例
根据表2,查得Input DNA 100ng时接头添加比例100:1,则接头添加摩尔数=100×0.5 pmol=50 pmol;
第三步,计算接头添加体积。接头浓度=15 μmol/L(如使用其他接头,浓度需要依据其他接头浓度参数);
接头添加体积=接头添加摩尔数(50 pmol)÷接头浓度(15 μmol/L)=3.34 μL(注:15 μmol/L=15 pmol/μL)
综上,接头可添加3.4 μL,加1.6 μL水补齐至5 μL。(注:接头最大加入体积不超过5 μL)
HB210810