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翌圣生物科技（上海）股份有限公司
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产品简介
| 供货周期 | 现货 | 规格 | 1 mL |
|---|---|---|---|
| 货号 | 10108ES03 | 应用领域 | 医疗卫生,化工,生物产业 |
| 主要用途 | 本产品主要应用于小鼠基因型鉴定。 |
产品介绍
产品描述
2×Hieff® HotStart PCR Genotyping Master Mix (With Dye)是即用型的PCR预混合溶液，含有Hieff® HotStart Taq DNA Polymerase，dNTP以及优化的缓冲体系，只需加入引物和模板即可进行扩增，大大简化了实验的操作步骤，可以高通量操作并提高实验结果的重现性。Hieff® HotStart Taq DNA Polymerase是经过配体修饰的热稳定 Taq DNA Polymerase，该配体可以随温度变化来调节 DNA 聚合酶活性。在室温下酶活性被 封闭，经95°C加热后活性才被释放。Hieff® HotStart DNA Polymerase 的激活时间只需要 2-3 min，兼容现有的 PCR 程序。本产品防止了在样品准备及反应升温阶段产生非特异扩增，可以有效地进行基因分型实验。
产品应用
本产品主要应用于小鼠基因型鉴定。
质量控制
核酸外切酶残留检测：20 μL本品和0.6 μg λDNA -HindIII，37°C下孵育4 h，DNA的电泳谱带无变化。
核酸内切酶残留检测：20 μL本品和1 μg λDNA，37°C温育4 h，DNA的电泳谱带无变化。
大肠杆菌残留DNA检测: 50 μL体系中，加入25 μL本品，以无菌ddH2O为模板，扩增E.coil 16s rDNA 基因。30个循环后扩增产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，无扩增条带。
运输与保存方法
冰袋运输。-20°C保存，有效期2年。
注意事项
1）为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
2）本产品仅作科研用途！
PCR反应体系（50 μL）
组分 | 体积 | 终浓度 |
ddH2O | to 50 μL | - |
模板DNA | 适量 | - |
Primer正向 (10 μM) | 2 μL | 0.4 μM |
Primer反向 (10 μM) | 2 μL | 0.4 μM |
2×Hieff® HotStart PCR Genotyping Master Mix (With Dye) | 25 μL | 1× |
【注】：针对不同模板的最佳反应浓度有所不同，下表为50 μL反应体系推荐模板使用量，仅供参考。
模板种类 | 模板使用量 |
基因组DNA | 50 ng-100 ng |
质粒DNA | 100 pg-20 ng |
cDNA | 1-5 μL (不超过反应体系的1/10) |
PCR扩增程序
循环步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
预变性 | 95°C | 5 min | 1 |
变性 | 95°C | 30 sec | 35 |
退火 | 50-60°C | 30 sec | |
延伸 | 72°C | 30 sec/kb | |
终延伸 | 72°C | 10 min | 1 |
【注】：
1）退火温度和时间：退火温度推荐使用50-60°C。退火时间推荐设置为30 sec，可以在20-30 sec内调节。可根据需要，设立温度梯度去摸索引物退火的最适温度和时间。
2）延伸温度和时间：温度推荐使用72°C。时间推荐使用30-60 sec/kb。
3）扩增产物：请将PCR扩增产物放置于-20°C保存，防止DNA发生降解。
相关产品
产品名称 | 货号 | 规格 |
Hieff® Taq DNA Polymerase DNA聚合酶 | 10101ES80/90 | 1000/5×1000 U |
2×Hieff® PCR Master Mix (With Dye) HOT | 10102ES03/08 | 1/5×1 mL |
2×Hieff® PCR Master Mix (No Dye) | 10103ES03/08 | 1/5×1 mL |
2×Hieff® Robust PCR Master Mix (With Dye) HOT | 10106ES03/08 | 1/5×1 mL |
2×Hieff Canace® PCR Master Mix 高保真酶预混液 | 10136ES03/08 | 1/5×1 mL |
HB211220
