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供货周期 | 现货 | 规格 | 8 T |
---|---|---|---|
货号 | 12608ES24 | 应用领域 | 医疗卫生,化工,生物产业 |
产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格(元) |
Hieff NGS® Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Module 快速末端修复/A尾添加模块 | 12608ES24 | 24 T | 3865.00 |
12608ES96 | 96 T | 11765.00 |
产品描述
Hieff NGS® Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Module是针对Illumina®高通量测序平台文库构建而专业设计的DNA末端修复/A尾添加模块,具有高效、快速、易实现自动化的优势。本产品兼容1 ng-1 μg片段化Input DNA,可在单管内实现片段化DNA的末端补平、5'端磷酸化和3'端加A尾反应,得到5'末端含磷酸基团且3'末端带有dA突出的DNA产物。该产物无需纯化,即可使用Hieff NGS® Fast-Pace DNA Ligation Module(Cat#12607)进行文库构建接头连接反应。
本产品已与Hieff NGS® Fast-Pace DNA Ligation Module(Cat#12607),2×Hieff Canace®Ⅱ High-Fidelity Mix for Library Amplification(Cat#12620)共同用于DNA文库构建,通过Illumina®高通量平台测序验证其有效性。本产品中提供的所有试剂组分均经过严格质检,最高程度保障产品优异性能与批间稳定性。
产品组分
组分编号 | 组分名称 | 24 T | 96 T |
12608-A | End Repair/dA-Tailing Buffer | 144 μL | 576 μL |
12608-B | End Repair/dA-Tailing Enzyme | 96 μL | 384 μL |
质量控制
Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Enzyme
1. SDS-PAGE纯度:>95%。
2. 核酸内切酶活性:50 μL反应体系中加入10 μL本酶和1 μg φX174 RF I DNA,37°C孵育4小时。经琼脂糖凝胶电泳检测,RF II转化比率<10%。
3. 磷酸酶活性:在磷酸酶活性检测缓冲液中加入10 μL本酶和2.5 mM对硝基苯磷酸,37°C孵育4小时。经光谱测定法检测,405 nm处无对硝基苯阴离子特征吸收峰。
4. 功能活性:在1×Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Enzyme中加入1 μL本酶和0.5 μg包含5'和3'突出末端的片段化DNA,25°C孵育20分钟。经毛细管电泳检测,末端修复、加dA尾并磷酸化的DNA比率>95%。
Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Buffer
1. 16小时孵育检测:50 μL反应体系中包含1×Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Buffer和1 μg HindIII-λDNA,37°C孵育16小时。经琼脂糖凝胶电泳检测,条带无降解;50 μL反应体系中包含1×Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Buffer和1 μg T3 DNA,37°C孵育16小时。经琼脂糖凝胶电泳检测,条带无降解。
2. 核酸内切酶活性:50 μL反应体系中包含1×Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Buffer和1 μg φX174 RF I DNA,37°C孵育4小时。经琼脂糖凝胶电泳检测,RF II转化比<10%。
3. RNase活性:在1×Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Buffer中加入40 ng FAM-RNA,37°C孵育16小时。经聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,条带无降解。
4. 磷酸酶活性:在磷酸酶活性检测缓冲液中加入1×Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Buffer和2.5 mM对硝基苯磷酸,37°C下孵育4小时。经光谱测定法检测,405 nm处无对硝基苯阴离子特征吸收峰。
测序验证
本品与Hieff NGS® Fast-Pace DNA Ligation Module(Cat#12607),2×Hieff Canace® High-Fidelity Mix for Library Amplification(Cat#12620)共同用于DNA文库构建,已通过Illumina®高通量平台测序验证其有效性。
运输与保存方法
冰袋运输。
-20℃保存,有效期1年。
注意事项
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法
1. 将表1中各试剂解冻后,颠倒混匀,置于冰上备用。
2. 于无菌PCR管中配制表1所示反应体系。
表1 末端修复/dA尾添加PCR反应体系
名称 | 体积(μL) |
Fragmented DNA | x |
End Repair/dA-Tailing Buffer | 6 |
End Repair/dA-Tailing Enzyme | 4 |
ddH2O | Up to 60 μL |
3. 使用移液器轻轻吹打或振荡混匀,并短暂离心将反应液离心至管底。
4. 将上述PCR管置于PCR仪,设置表2所示反应程序,进行末端修复/dA尾添加反应。
表2 末端修复/dA尾添加PCR反应程序
温度 | 时间 |
热盖105°C | On |
30°C | 20 min |
72°C | 20 min |
4°C | Hold |
5. 产物如需纯化,可使用Hieff NGS® DNA Selection Beads(Cat#12601)或AMPure XP Beads(Cat#A63880)或其他等效产品。
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