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产品简介
| 供货周期 | 现货 | 货号 | 11123ES60 |
|---|---|---|---|
| 应用领域 | 生物产业 |
产品介绍
Hifair® Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR
(gDNA digester plus)
产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 储存 | 价格（元） |
Hifair® Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR (gDNA digester plus) | 11123ES10 | 10 T | -20℃ | 236.00 |
Hifair® Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR (gDNA digester plus) | 11123ES60 | 100 T | -20℃ | 955.00 |
产品描述
Hifair® Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR (gDNA digester plus)基于Hifair® Ⅱ Reverse Transcriptase而开发的即用型预混液。该酶的热稳定性大幅度提高，可耐受高达50℃的反应温度，适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。同时，该酶增强了与模板的亲和力，适合少量模板以及低拷贝基因的逆转录。
该预混液包含gDNA digester和2×Hifair® Ⅱ SuperMix plus。gDNA digester可去除RNA模板中残留的基因组DNA污染，保证后续结果更加可靠。2×Hifair® Ⅱ SuperMix plus含有逆转录反应所需的所有组分（Buffer，dNTP，Hifair® Ⅱ Reverse Transcriptase，RNase inhibitor，Random primers/ Oligo (dT)18 primer mix），只需加入RNA模板和 RNase-free ddH2O即可进行逆转录反应，并同时终止gDNA digester的作用，保证cDNA的完整性。
该产品适用于两步法RT-qPCR检测，针对qPCR进行Random primers/ Oligo (dT)18 primer的比例优化，使cDNA合成可从RNA转录本的各个区域起始，并具有相同的逆转录效率，///大程度保证了qPCR结果的真实性和可重复性。逆转录产物兼容SYBR® Green和探针法qPCR，可以根据实验目的，选择UNICON® qPCR SYBR® Green Master Mix，Hieff® qPCR SYBR® Green Master Mix或Hieff® qPCR TaqMan Probe Master Mix等试剂配合使用，进行高性能的基因表达分析。
产品组分
编号 | 组分 | 产品编号/规格 | |
11123ES10 (10 T) | 11123ES60 (100 T) | ||
11123-A | RNase-free ddH2O | 1 mL | 2×1 mL |
11123-B | 5×gDNA digester Buffer | 20 μL | 220 μL |
11123-C | gDNA digester | 10 μL | 100 μL |
11123-D | 2×Hifair® Ⅱ SuperMix plus | 100 μL | 1 mL |
【注】：2×Hifair® Ⅱ SuperMix plus含有gDNA digester抑制剂。
运输与保存方法
干冰运输。-20℃保存。
注意事项
1）gDNA digester和2×Hifair® Ⅱ SuperMix plus含有高浓度的甘油，使用前请短暂离心，吹打混匀。
2）建议RNA是溶于水而不是TE Buffer中，因为TE Buffe会干扰gDNA去除以及逆转录反应。
3）可以不经过基因组去除步骤，直接进行逆转录，这样所得到的结果与使用Hifair® Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix (Cat 11120ES) 效果一致。但是请勿将gDNA digester与11120ES中的2×Hifair® Ⅱ SuperMix配套使用，因其不含终止gDNA digester反应的成分，会影响反转录和后续的qPCR实验；
4）反应液的配制应在冰上操作完成，操作过程应避免RNase污染；
5) 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
第—链cDNA合成操作步骤
1. 残留基因组DNA去除
在RNase free离心管中配制如下混合液，用移液器轻轻吹打混匀。42℃孵育2 min。
组分 | 使用量 |
RNase free ddH2O | To 10 μL |
5×gDNA digester Buffer | 2 μL |
gDNA digester | 1 μL |
Total RNA | 1 ng -5 μg* |
or mRNA | 1 ng-500 ng* |
【注】：* 20 μL逆转录反应体系建议Total RNA的投入量不超过1 μg。如果目的基因的表达丰度低，多投入5 μg Total RNA，否则RNA投入量过高，可能会超过后续定量PCR的线性范围。
2. 逆转录反应体系配制（20 μL体系）
在第1步的反应管中直接加入2×HifairTM Ⅱ SuperMix plus，用移液器轻轻吹打混匀。
组分 | 使用量 |
第1步的反应液 | 10 μL |
2×Hifair® Ⅱ SuperMix plus | 10 μL |
3. 逆转录程序设置
标准程序（适用于微量和常规量的模板量）
温度 | 时间 |
25℃ | 5 min |
42℃ | 30 min |
85℃ | 5 min |
【注】：逆转录温度：推荐使用42℃。对于高GC含量模板或者复杂模板，可将逆转录温度提高到50℃。
4. 逆转录产物可立即用于qPCR反应，也可-20℃短期保存，若需长期保存，建议分装后，于-80℃保存，避免反复冻融。
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