Streptavidin (SAV) MagBeads 链霉亲和素（SAV）免疫磁珠

产品信息

产品描述

链亲和素(streptavidin)是一种来源于阿维丁链霉菌由四个相同亚基组成的结合蛋白质，每个亚基均有一个与有高亲和力的结合位点。生物学上常将链霉亲和素包被在磁珠上，借链霉亲和素-高亲和力结合特性，结合素化蛋白，多肽，及非蛋白质（如各种 DNA、RNA 分子）等分子，进而从混合体系中快速分离化成分，进行如亲和纯化，细胞分离，DNA 探针分析和 mRNA 分离等多方面应用。

本品streptavidin 磁珠可配合实验需要选择标记的各种单抗去分离细胞，应用范围广泛，使用灵活。其原理是在实验系统中加入标记的单抗，磁珠通过 streptavidin 与标记的单抗结合后，单抗与细胞表面相应抗原特异性结合而使细胞被磁珠间接捕获，从而达到纯化分离细胞的目的。

产品性质

运输和保存方法

冰袋运输。4℃保存。

注意事项

1）免疫磁珠易沉降聚集，因此产品使用前要剧烈振荡或超声处理。

2）Fc 受体（FcR）封闭：在某些实验中，部分抗体会通过其Fc段与不同细胞表面的FcR 结合，出现非特异性反应。此时可预先将细胞与IgG 或针对FcR的特异性抗体室温孵育5-10min，一般10⁷细胞中可加入1-10μg IgG或FcR 的特异性抗体进行封闭。

3）如果分选的细胞进一步用作细胞培养实验，所有步骤都需在无菌环境及条件下进行。

4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法（细胞分选操作流程）

由于不同抗体的亲和力，欲分离细胞在混合体系中所占比例以及细胞表面靶抗原密度的差异，操作流程中所提供的相关参数不一定适用于所有的细胞分选实验。因此实验前应对 化抗体使用浓度，磁珠与细胞反应比例，及反应时间进行滴定，优化以达到*的细胞分选效果。

1. 分离单细胞：使用淋巴细胞分离液从抗凝血中提取外周血单个核细胞（PBMC），或者从淋巴组织中制备单细胞悬液。PBMC用含5%BSA，0.09%NaN₃的PBS，pH7.4 洗3次，40-70μm尼龙网过滤去除细胞团块和碎片后调整细胞数为2-3×10⁷/ml。

【注】：反应体系中加入5-10%蛋白可降低非特异性反应，但蛋白浓度太高会降低分选效率。

2. 向PBMC 中加入适量化抗体，一般1×10⁷ PBMC 中加入0.5-10μg 抗体，室温反应30min。

3. 1000rpm离心5min，弃上清中未结合的化抗体。加入1ml磁珠分选缓冲液重悬细胞，1000rpm 离心5min，弃上清，洗2次。

4. 1ml磁珠分选缓冲液重悬细胞，将细胞与50μl 免疫磁珠混合，室温反应30min，间隔10min轻轻晃动反应管，避免磁珠沉淀，使磁珠与细胞充分反应，尽量防止出现气泡。之后进入后续细胞分选。

5. 细胞分选 (Negative Selection)

5.1 阴性分选

① 磁分器分离5-8min，收集未被免疫磁珠结合的细胞悬液至另一干净管中。

② 加入1ml磁珠分选缓冲液重悬磁珠，用玻璃滴管或移液枪枪头反复吹打磁珠。

③ 重复步骤①，合并两次收集的细胞悬液，可将细胞悬液再置磁分离器分离 5-8min，可明显增加靶细胞纯度。

5.2 阳性分选 (Positive Selection)

① 磁分离器分离5-8min，去除未与磁珠结合的细胞。

② 结合了靶细胞的免疫磁珠用1ml 磁珠分选缓冲液洗5次（5×1ml）后，可直接进行流式检测，或者37℃培养48h可使细胞与磁珠分离。

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