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上新 | 热稳定、低宿主残留的RNase HII来咯！
2023-12-4 阅读(27)
上新 | 热稳定、低宿主残留的RNase HII来咯！
图1. RNase HII反应原理示意图
RNase HII应用
依赖于Rnase HII的PCR (rhPCR)
rhPCR引物是在高度保守的目标寡核苷酸序列区域内插入1段RNA碱基序列，形成DNA-RNA-DNA的碱基序列，并且该引物的3'-末端被化学基团封阻，该引物未切割时无法正常延伸。Rnase HII可以特异性地水解DNA-rN-DNA/DNA杂合链中的RNA，但不能水解单链或双链DNA或RNA中的磷酸二酯键。因此只有当封闭引物与靶DNA互补时，Rnase HII才能使DNA-rN-DNA/DNA杂合链在RNA碱基的5'-侧发生裂解，留下具有3'-羟基的DNA寡核苷酸，该3'-羟基DNA寡核苷酸能够起到引物的作用，从而允许引物延伸。rhPCR利用Rnase HII的特异性作用，实现了对DNA-rN-DNA/DNA杂合链的特异水解，从而实现引物的准确延伸，提升了反应的特异性。
图2. rhPCR原理图[1]
环介导等温扩增技术(LAMP)
将RNase HII应用于LAMP扩增体系后，能有效解决LAMP技术的假阳性问题，为LAMP技术更加广泛的应用于临床诊断。如图3所示，利用Rnase HII引物激活的LAMP方法(PA-LAMP)，当引物与靶ssDNA配对时，Rnase HII酶特异性切割引物上的RNA，激活引物，从而允许引物延伸，实现特异性扩增，有效减少体系中的假阳性。
图3. PA-LAMP原理示意图[2]
翌圣RNase HⅡ
部分数据展示
E. coli基因组DNA残留< 0.01copies/1 U
图4. E. coli基因组DNA残留检测
95℃耐热性测试
对RNase H II (Cat#14539ES)进行95℃加热0~45 min后，测试RNase HII的酶活结果，结果表明翌圣RNase HII加热45 min后，酶活几乎没有损失。
图5. 95℃耐热测试
无核酸外切酶、切口酶、RNase残留
图6. 核酸外切酶、切口酶、RNase残留检测结果
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