细胞凋亡的检测方法

一、形态学观察方法

1）HE染色、光镜观察：凋亡细胞呈圆形，胞核深染，胞质浓缩，染色质成团块状，细胞表面有“出芽”现象。

2）丫啶橙（AO）染色，荧光显微镜观察：活细胞核呈黄绿色荧光，胞质呈红色荧光。凋亡细胞核染色质呈黄绿色浓聚在核膜内侧，可以看见细胞膜呈泡状膨出以及凋亡小体。

3）台盼蓝染色：如果细胞膜不完整、破裂，台盼蓝染料进入细胞，细胞变蓝，则为坏死。如果细胞膜完整，细胞不被台盼蓝染色，则为正常细胞或凋亡细胞。此方法对反映细胞膜的完整性，区别坏死细胞有一定的帮助。

4）透射电镜观察：可以看见凋亡细胞表面微绒毛消失，核染色质固缩、边集，通常呈新月形，核膜皱褶，胞质紧实，细胞器集中，胞膜起泡或出“芽”及凋亡小体和凋亡小体被临近巨噬细胞吞噬现象。

二、DNA凝胶电泳

（一）、检测原理

细胞发生凋亡或坏死，其细胞DNA均会发生断裂，细胞内小分子量DNA片断增加，高分子DNA减少，胞质内出现DNA片断。但凋亡细胞DNA断裂点均有规律的发生在核小体之间，出现180－200bpDNA片断，而坏死细胞的DNA断裂点为无特征的杂乱片断，利用此特征可以确定群体细胞的死亡，并且可与坏死细胞区别。

（二）结果判断

正常活细胞DNA 电泳出现阶梯状（LADDER）条带；坏死细胞DNA电泳类似血抹片时的连续性条带。

三、酶联免疫吸附法（ELISA）核小体测定

凋亡细胞的DNA断裂使细胞质内出现核小体。核小体由组蛋白及其伴随的DNA片断组成，可用ELISA法检测。

（一）检测方法

1、将凋亡细胞裂解后高速离心，其上清液中含有核小体

2、在微定量板上吸附组蛋白体

3、加上清液使抗组蛋白抗体与核小体上的组蛋白结合

4、加速过氧化物酶标记的抗DNA抗体使之与核小体上的DNA结合

5、加酶的底物，测光吸收度

（二）用途

该法敏感性高，可检测5*100/ml个凋亡细胞。可用于人、大鼠、小鼠的细胞凋亡检测。该方法不需要特殊仪器，适合基层工作，但是不能的测定凋亡细胞发生的量。