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沪鼎解说 ELISA试剂盒原理及清洗
阅读:784 发布时间:2014-9-24 根据上海沪鼎技术部研究呈现,美国TSZ品牌ELISA试剂盒有双抗夹心法、间接法、竞争法、捕获包被法、ABS这五种检测系统,应用定性夹心免疫检测技术原理是:用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板条,这些多肽是中国型HEV毒株核心氨基酸序列中抗原性很强的肽段,分别来自于该毒株的开放阅读框2和开放阅读框3。
将样品或标准品加入 孔中并孵育,如果其中存在HEV IgM抗体,这些抗体就会与HEV的多肽抗原结合,并固定在上面,洗板除去其它非特异性抗体和样品中的其它成份。然后加入羊抗人IgM-HRP酶结合物,经第二次孵育后,酶结合物就会与*次孵育结合上的HEV IgM抗体相结合,洗板除去未结合的酶结合物,加入TMB底物溶液,在第三次孵育时会发生酶-底物反应,只有那些含有HEV IgM抗体和酶结合物所形成的复合物的孔才会发生颜色变化,加入硫酸溶液终止酶和底物间的反应,并在波长:450nm处测量O.D.值,按照本HEV IgM抗体elisa试剂盒的测试标准,O.D.值大于或等于Cut-Off值的样品被认为是初试阳性。
·ELISA试剂盒的清洗
试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA)。已知浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将生物素标记的抗体同时温育。洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中的浓度呈比例关系。
免疫测定技术的基础在于抗原抗体之间的特异结合反应,所以任何的诊断试剂离不开的原料,如抗原抗体,酶等。以前用于免疫测定的抗原通常为各种纯化抗原,而抗体则为纯化抗原免疫动物后获得的多克隆抗体和使用杂交瘤技术得到的 单克隆抗体,而抗原或抗体的标记物如酶标结合物则通过各种化学合成方法制备。近年来,随着分子生物学的发展,使用 基因工程方法制备各种特殊的抗原或抗体及其酶结合物等免疫测定试剂几成为现实的新一代试剂,各种新型使用的ELISA试剂盒测定方法也不断出现。