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分枝杆菌的细胞壁内含有大量脂质包围在肽聚糖的外面, 所以分枝杆菌一般不易着色，分枝杆菌中的分枝菌酸与染料一旦结合后，就很难被酸性脱色液脱色，故名抗酸染色。传统的染色方法要经过加热和延长染色时间来促使其着色，其中代表性的是结核杆菌Ziehl－Neelsen染色法，该法是WHO和中国结核病防治规划中推荐的热染方法。
Leagene(Ziehl－Neelsen热染法)属于热染色液，其染色原理是在加热条件下，分枝菌酸与复红结合成复合物，经复染后，分枝杆菌仍然为红色，而其他细菌及背景中的物质为蓝色，该试剂更适用于冷染法效果不佳的情况。该试剂仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。
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