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Acridine Orange属于三环杂芳香燃料,可以标记DNA、RNA,属于异染性荧光染料。该染料具有膜通透性,能透过细胞膜,使核DNA和RNA染色,因此AO常用于细胞内DNA和RNA进行检测。AO与核酸结合方式主要有:1、插入性结合,AO嵌入核酸双链的碱基对之间,这种结合方式主要为AO与DNA的结合,其荧光发射峰为530nm,激发后呈绿色荧光;2、静电吸引,带正电荷的AO与单链核酸的磷酸根(带负电荷)产生静电间的吸引结合,这种结合方式主要为AO与RNA的结合,其荧光发射峰为640nm,激发后呈红色荧光,少量结合会呈橘黄色或桔红色荧光,因此吖啶橙嵌合到双链DNA中显绿色,与单链DNA或RNA结合时发橘黄色或橙红色荧光。
Leagene AO染色液(1mg/ml)为储存液,使用时应稀释到合适浓度后使用,染色后在荧光显微镜下观察,AO可透过正常细胞膜,使细胞核呈绿色或黄绿色均匀荧光;而在凋亡细胞中,因染色质固缩或断裂为大小不等的片段,形成凋亡小体。AO使其染上致密浓染的黄绿色萤光或黄绿色碎片颗粒,而坏死细胞黄荧光减弱甚至消失;AO染色常与EB染色合用双染,因EB只染死细胞使之产生橘黄色荧光,由此可区分出正常细胞、凋亡细胞及坏死细胞。该试剂仅用于科研领域,不适用于临床诊断或其他用途。
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