白介素-6 ELISA KIT

白介素-6 ELISA KIT 是一款用于定量检测生物样本中白介素 - 6 含量的工具，在免疫学、炎症研究等科研领域应用广泛。以下为你展开介绍：

1. 检测原理：采用双抗体夹心 ELISA 技术。试剂盒中的酶联板已预包被抗 IL-6 特异性抗体。加入样本后，样本中的 IL-6 与固相抗体特异性结合，形成抗原 - 抗体复合物。随后加入酶标记的抗 IL-6 抗体，其与已结合在固相抗体上的 IL-6 进一步结合，形成 “固相抗体 - IL-6 - 酶标抗体" 的夹心结构。经过洗涤步骤，去除未结合的物质，再加入底物溶液（如 TMB）。在酶的催化下，底物发生显色反应，颜色的深浅与样本中 IL-6 的含量成正比。通过酶标仪在特定波长（通常为 450nm）下测量吸光度，与标准曲线对比，即可计算出样本中 IL-6 的浓度 。

2. 试剂盒组成

• 酶联板：有 96 孔或 48 孔规格，预包被抗 IL-6 抗体，是反应的载体。

• 标准品：一般为冻干品，通常有 2 瓶。临用前需用标准品稀释液复溶，并稀释成不同浓度梯度，如 0、15.6、31.2、62.5、125、250、500、1000 pg/mL 等，用于绘制标准曲线 。

• 样本xi释液：用于稀释浓度过高的待测样本，确保样本浓度在试剂盒的检测范围内。

• 酶标抗体：即 HRP 标记的抗 IL-6 抗体，为浓缩液，需使用酶标抗体稀释液按要求进行稀释。

• 酶标抗体稀释液：专门用于稀释酶标抗体。

• 底物溶液：如 TMB 底物，与酶标抗体中的 HRP 发生反应产生颜色变化 。

• 洗涤液：多为浓缩液，使用时需按比例用蒸馏水或去离子水稀释，用于洗涤酶联板，去除未结合的物质，降低背景干扰 。

• 终止液：一般为强酸溶液（如硫酸），用于终止底物的显色反应，使反应液颜色稳定，便于读数 。

• 封板膜：在温育过程中覆盖酶联板，防止液体蒸发和外界污染 。

• 使用说明书：详细介绍试剂盒的使用方法、注意事项、性能指标等 。

3. 样本要求

• 血清：采集血液后，室温放置 2 小时或 4℃过夜，1000×g 离心 20 分钟，取上清备用。采血应使用无热原、无内毒素的一次性器材 。

• 血浆：可用乙二胺四乙酸（EDTA）、肝素等抗凝剂。样本采集后 30 分钟内，在 2 - 8℃下 1000×g 离心 15 分钟，取上清 。

• 细胞培养上清：将细胞培养上清 1000×g 离心 20 分钟，去除细胞碎片和杂质后，取上清用于检测 。

• 组织匀浆：用预冷的磷酸盐缓冲液（PBS，0.01M，pH = 7.4）冲洗组织，去除残留血液。剪碎组织后，按 1:9（w/v）加入 PBS，在冰上充分研磨。再经 5000×g 离心 5 - 10 分钟，取上清用于检测 。

• 样本采集后若短期内检测，可保存于 4℃；若需长时间保存，需置于 - 20℃或 - 80℃冻存，且要避免反复冻融，溶血样本一般不适合检测 。

4. 操作流程

• 准备工作：从冰箱取出试剂盒，提前 30 分钟平衡至室温。同时，将浓缩洗涤液按要求比例用蒸馏水或去离子水稀释备用 。

• 加样：设置空白孔、标准品孔和样本孔。空白孔加入样本xi释液，标准品孔加入不同浓度的标准品，样本孔加入处理好的样本，每孔加样量通常为 100μL，轻轻混匀，37℃温育 90 分钟 。

• 洗涤：温育结束后，弃去孔内液体，用洗涤液加满各孔，浸泡 1 - 2 分钟后甩干，重复洗涤 5 次，确保che底洗净未结合物质 。

• 加酶标抗体：每孔加入 100μL 稀释好的酶标抗体工作液，37℃温育 60 分钟 。

• 再次洗涤：重复上述洗涤步骤 。

• 显色：每孔加入 90μL 底物溶液，轻轻混匀，37℃避光显色 15 - 30 分钟（需根据实际显色情况判断） 。

• 终止反应：每孔加入 50μL 终止液，此时溶液颜色由蓝色变为黄色 。

• 读数：在加终止液后 15 分钟内，用酶标仪在 450nm 波长处测量各孔的吸光度（OD 值） 。

• 计算结果：以标准品浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，绘制标准曲线。根据样本的 OD 值从标准曲线中查出对应的浓度，若样本进行了稀释，需乘以相应的稀释倍数，从而得到实际浓度 。

5. 性能指标

• 检测范围：不同试剂盒有所差异，常见的检测范围为 15.6 - 1000 pg/mL 等区间，可满足多种样本中 IL-6 含量的检测需求 。

• 灵敏度：一般可低至 7.8 pg/mL 甚至更低，能够检测到样本中微量的 IL-6 。

• 特异性：对 IL-6 具有高度特异性，与其他细胞因子等物质几乎无交叉反应 。

• 重复性：板内变异系数一般小于 10%，板间变异系数小于 15%，保证了检测结果的稳定性和可靠性 。