CY3标记-Recombinant Protein A，重组蛋白A

瑞禧提供CY3修饰与标记的蛋白，人血清白蛋白HSA、链霉亲和素Streptavidin、标记亲和素 Avidin、胰岛素 Insulin、偶联刀豆球蛋白A Concanavalin A、标记鬼笔环肽 Phalloidin、CY3-重组蛋白A Recombinant Protein A、标记鸡卵白蛋白 Ovalbumin、修饰人转铁蛋白 Transferrin、牛血清白蛋白BSA、，纯度大于99%，可以提供COA和核磁、HPLC图谱报告，2周内如遇质量问题。

CY3-人转铁蛋白      CY3-Transferrin

CY3-泛素 CY3-Ubiquitin

CY3-琥珀酰化钥孔傶血兰蛋白 CY3-Succinylated Keyhole Limpet

CY3-钥孔傶血兰蛋白 CY3-Keyhole Limpet Hemocyanin(KLH)

CY3-肌钙蛋白I

CY3-C-反应蛋白

CY3标记纤维蛋白

CY3-Proteinase K  标记蛋白K

CY3-Lysozyme(溶菌)

CY3-Lyticase (10U/μl)溶壁

CY3-Snailase偶联蜗牛

CY3-Mouse Serum Albumin  标记小鼠血清白蛋白

CY3-Canine Serum Albumin 修饰犬血清白蛋白

CY3-Wheat Gliadin标记小麦醇溶蛋白

CY3-鬼笔环肽 CY3-Phalloidin

CY3-玉米蛋白CY3-Zein

CY3-鱼精蛋白硫酸盐CY3-Protamine sulfate salt

CY3-牛血红蛋白CY3-Hemoglobin from bovine blood Hemoglobin

CY3-γ-球蛋白γ-Globu lins from bovine blood

CY3-牛纤维蛋白原()，CY3-Fibrinogen

CY3荧光染料可以用于标记不同的目标分子：

• 可在有机溶剂中溶解的蛋白质

• 抗体 (use 5-10% of DMSO/DMF)

• DNA和寡核苷酸

• 多肽

• 其他小分子，包括用小分子及

CY3标记-Recombinant Protein A，重组蛋白A

菁染料琥珀酰亚胺酯（Cy3 NHS）的标记蛋白步骤：

菁染料和生物分子的比例F/P=4～12之间荧光度， F/P值过荧光探针会自我淬灭并影响生物分子的生物活性，标记生物分子是用单琥珀酰亚胺酯，但是用双修饰的CyDye NHS并没有发现交联。CyDye NHS标记抗体在pH (8.5～9.4)时10分钟F/P可达5～6，而在pH 7.0几乎不反应。我们用不同比例的Cy3标记anti-glutathione-S-transferase(GST)多克隆抗体发现用1:1，5:1，10:1 和 20:1标记时得到的F/P值分别是 0.28:1，1.16:1，2.3:1和4.6:1。

操作步骤：

一、 水溶性Cy3 NHS ester标记anti-GST多克隆抗体

上买到的抗体如果含有其它蛋白（例如serum albumin或gelatin等）或带氨基的缓冲液会影响标记，在标记前需纯化。

1. 在1 L 0.15 M NaCl 溶液中透析anti-GST抗体(浓度为 0.5 mL at3 mg/mL)，常温透析4小时。

2. 在4°C用鲜的1 L 0.15 MNaCl 溶液再透析过夜。

3. 天用1 L 0.1 M NaHCO3 (pH 8.3)透析4小时。

4. 用0.22 μm注射器过滤头过滤抗体溶液。

5. 用0.1 M NaHCO3 稀释少量的抗体，在280nm处测其紫外吸收值计算标记抗体的总量 （IgGantibody摩尔吸光系数170 000 M-1 cm-1 at 280 nm).

6. 用DMSO配置Cy3 NHS (MW765.95) 溶液浓度为10 mg/mL；计算所需体积以得到想要的CyDye NHS 和抗体的比值(例如20:1)，然后慢慢将其加入到抗体溶液中，同时在暗处常温缓慢搅拌45分钟。

7. 用1 L 0.15 M NaCl 溶液常温避光透析4小时除去未标记上的Cy3。

8. 在4°C用鲜的1 L 0.15 MNaCl 溶液再避光透析过夜。

9. 用1 L of 0.01 M PBS/ 0.01% 溶液常温避光透析4小时， 在4°C常温避光再次透析过夜。

10. 用0.22 μm注射器过滤头过滤抗体溶液。

11. 用0.01 M PBS/0.01 %整数倍稀释标记抗体溶液，测量280nm（蛋白）和552nm（Cy）处的紫外可见吸光度。

12. 产品冷冻干燥成粉末或在0.01 M PBS/ 0.01% 溶液中，-20℃避光储存。

F/P计算：

Cy3在552nm摩尔吸光系数为150 000M-1cm-1；此蛋白在280nm的摩尔吸光系数为170 000

M-1cm-1；不同蛋白的摩尔吸光系数不一样；Cy3 染料本身在280 nm 的吸收是552nm处的8%。

按以下公式计算F/P值。

[Cy3] = A552/150000

[antibody] = {A280 - (0.08×A552)}/170000

F/P final= [Cy3]/[antibody]= {1.13×A552}/{A280 - (0.08×A552)}

瑞禧提供CY3标记的蛋白产品：

CY3-血球凝集素 CY3-Hemagglutinin

CY3-Annexin 膜联蛋白

CY3-金黄色葡萄球菌蛋白A（r-SPA）

CY3-链球菌蛋白G（r-SPG）

CY3-耐碱性蛋白A（r-ATPA）

CY3-Proteinase K

CY3-Protein A标记蛋白K

CY3-Heparin 修饰素

CY3-Casein 修饰酪蛋白

CY3-Actin标记肌动蛋白

CY3-Histone 修饰组蛋白

CY3-Hemoglobin 修饰血红蛋白

CY3-Mucin 标记粘蛋白

CY3-Nucleohistone 标记核酸组蛋白/核仁蛋白

CY3-lactalbumin标记乳白蛋白

CY3-Lipopolysaccharides 标记脂多糖

CY3-Lectins标记凝集素

CY3-Lactoferrin修饰乳铁蛋白

CY3-Azo-Casein修饰偶氮酪蛋白

CY3-Laminin 标记层粘蛋白

CY3-Keratin azure修饰天青角蛋白

CY3-Protamine标记鱼精蛋白

CY3-Ferredoxin 修饰铁氧还蛋白

CY3修饰载脂蛋白E

CY3-触珠蛋白

Cyanine3，CY3染料是近红外荧光染料中较的一类荧光染料，和组织的自发荧光在近红外波段小，能提供的特异性和灵敏度，菁染料是二个非区域电荷的氮原子通过聚合搭桥的方式形成的一种分子，以下图片*诠释：

CY3菁染料是近红外荧光染料中较的一类荧光染料，统的可见光染料相比有的。由于和组织的自发荧光在近红外波段小，因此在检测复杂生物时，近红外染料能提供的特异性和灵敏度。同时，由于光波在近红外区段的组织透过性好。菁染料的摩尔吸光系数在荧光染料中是的。

以上蛋白还可以用CY5/CY5.5/CY7/CY7.5/ICG/IR-825/Comarin/Bodipy/荧光量子点/AuNRs纳米金/HRPFITC/Rhodamine/NHS/氨基NH2/Biotin/叠氮N3/醛基CHO/巯基SH/马来酰亚胺MAL/炔烃Alkyne/DBCO/PEG/FITC/TRITC/Biotin/thiol修饰/标记

温馨提示：用于科研哦，不能用于人体、开发、和其他商业用途