化工仪器网
产品简介
| 供货周期 | 现货 | 规格 | 5×105cells/T25细胞培养瓶 |
|---|---|---|---|
| 货号 | A01X2035 | 主要用途 | 仅供科研研究实验 |
| 组织来源 | 正常主动脉组织 | 种属来源 | 兔 |
| 生长特性 | 贴壁 | 细胞形态 | 长梭形细胞，不规则细胞 |
详细介绍
一、细胞基本属性：
细胞名称 | 兔主动脉弓平滑肌细胞 | 商品货号 | A01X2035 |
组织来源 | 正常主动脉组织 | 产品规格 | 5×105cells/T25细胞培养瓶 |
种属来源 | 兔 | 传代特性 | 根据细胞特性 |
生长特性 | 贴壁 | 细胞形态 | 长梭形、不规则细胞 |
包被条件：
培养基：原代平滑肌细胞培养体系
换液频率：每2-3天换液一次
传代比例：
消化液：0.25%胰蛋bai酶
培养条件：气相：空气，95%；CO2，5%
细胞简介 |
血管疾病发生和发展的一个主要因素是由于血管平滑肌细胞（smooth muscle cells, SMCs）转变成为了具有繁殖能力的表型。近期的研究表明平滑肌细胞能表达钙离子通道，ICAM-1和VCAM-1。其中ICAM-1和VCAM-1的表达可能是造成血管壁炎症反应，并进一步造成血管疾病的原因 。因此，对血管平滑肌细胞的体外培养和研究可用来发现和确定新的血管疾病的靶向治疗方法。 |
原代细胞实验步骤：
一、取7-10d雄性SD大鼠，颈椎脱臼处死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。
二、在超净工作台中，将大鼠断头置于玻璃培养皿中，打开颅腔后取出全脑,放在盛有预冷的PBS玻璃培养皿中，去除小脑和间脑。
三、将大脑半球在干滤纸上缓慢滚动以去除软脑膜和脑膜大血管，再放在新的盛有预冷的PBS玻璃培养皿中。
四、用细解剖镊去除大脑白质、残余大血管和软脑膜，保留大脑皮质。
五、大脑皮质放于DMEM中，剪碎成约1mm3大小，放入50ml的离心管中，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型胶原酶，0 .025-0 .05％IV型胶原酶，200-400U DNaseI)，混匀后37℃水浴消化1-1.5h。
六、室温1 000×g离心8min，去上清液。
七、沉淀中加入20％BSA重悬浮，充分混匀，1 000×g，20min，4℃离心，去上清。
八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的胶原酶/分散酶，0.05-0.1％I型胶原酶，100-300U DNaseI )重悬浮，混匀，37℃水浴消化0.5-1h，700×g室温离心6min，去上清液。
九、沉淀加入2ml DMEM培养液悬浮混匀，铺于经离心形成连续梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g，60min，4℃)，1000×g，4℃离心10min。
十、靠近底部的红细胞层之上的白黄色的层面即为纯化的微血管段，吸出后DMEM
漂洗两次(离心1000×rpm，6min，室温)，去上清液。
加入DMEM培养液(20％FBS，4ug/ml嘌呤霉素 )重悬浮，接种于含5％的大鼠 血清37℃孵育过夜所制备的细胞培养皿中，置于37℃、5％CO2培养箱内静置培养24h后更换不含嘌呤霉素的混合培养基，随后隔天换液。
原代细胞使用方法：
是一种贴壁细胞，细胞形态呈长梭形、不规则细胞，在技术部标准操作流程下，细胞可传2-3代；建议您收到细胞后尽快进行相关实验。
客户收到细胞后，请按照以下方法进行操作。
1. 取出T25细胞培养瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4h，以稳定细胞状态。
2. 贴壁细胞消化
1)吸出T25细胞培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次；
2)添加0.25%消化液1mL至T25培养瓶中，轻微转动培养瓶至消化液覆盖整个培养瓶底后，吸出多余消化液，37℃温浴1-3min；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后，再加入5ml培养基终止消化；
3)用吸管轻轻吹打混匀，按传代比例接种T25培养瓶传代，然后补充新鲜的培养基至5mL，置于37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养；
4)待细胞贴壁后，培养观察；之后按照换液频率更换新鲜的培养基。
3. 细胞收货脱落
1)收集所有细胞悬液，1000rpm，离心5min，保留沉淀；
2)添加0.25%消化液0.5mL至离心管中，重悬沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱静置5-7min)；消化完向离心管内加入5ml培养基终止消化；
3)经1000rpm，离心5min，丢弃上清，用5ml培养基重悬沉淀，接种于新的培养瓶内；
4)待细胞贴壁后，培养观察；之后按照换液频率更换新鲜的培养基(37℃预热)。
5)原瓶内贴壁细胞按正常消化处理。
4. 细胞实验
因原代细胞贴壁特殊性，贴壁的原代细胞在消化后转移至其他实验器皿（如玻璃爬片、培养板、共聚焦培养皿等）时，需要对实验器皿进行包被，以增强细胞贴壁性，避免细胞因没贴好影响实验；包被条件常选用鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚赖氨酸PLL（0.1mg/ml），明胶（0.1%），依据细胞种类而定。悬浮/半悬浮细胞无需包被。
公司正在出售的产品：
小鼠脾脏成纤维样细胞；C57/B6-SPL
幼兔肾上皮样细胞
幼兔肺成纤维样细胞
幼兔骨髓间充质干细胞
非洲绿猴胚胎肾细胞；marc145
人肝癌细胞；HepG2
人肾透明细胞腺癌细胞；786-O[786-0]
人神经母细胞瘤；SH-SY5Y
人乳腺癌细胞；MDA-MB-231
人肝癌细胞；Huh-7
人B淋巴细胞白血病细胞；BALL-1
人膀胱移行细胞癌细胞；T-24
黑腹果蝇胚胎细胞；D.Mel
人结肠癌细胞；CaCo-2
中国地鼠卵巢细胞－木糖基转移酶I缺陷型；pgsA-745
营养琼脂培养基
Nutrient Agar Medium
营养肉汤培养基（中国药典）
0
微生物限度检查培养基
玫瑰红钠琼脂培养基
Rose Bengal Agar Medium
酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基（YPD）
Yeast Peptone Dextrose Agar
乳糖发酵培养基
兔主动脉弓平滑肌细胞Lactose Broth
曙红亚甲基蓝琼脂培养基（EMB）
Eosin-Methylene Blue Agar
4-甲基伞形酮葡糖苷酸（MUG）培养基(05药典)
MUG Medium
化工仪器网