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详细介绍
一、细胞基本属性：
细胞名称 | 兔子宫内膜上皮细胞 | 商品货号 | A01X2120 |
组织来源 | 子宫组织 | 产品规格 | 5×105cells/T25细胞培养瓶 |
种属来源 | 兔 | 传代特性 | 可传1-2代 |
生长特性 | 贴壁 | 细胞形态 | 上皮细胞样 |
细胞简介 |
兔子宫内膜上皮细胞分离自子宫组织；子宫是孕育胎儿的器官，位于盆腔中部，膀胱与直肠之间，其位置可随膀胱与直肠的充盈程度或体位而有变化。子宫的正常位置主要依靠子宫诸韧带、盆膈、尿生殖膈及会阴中心腱等结构维持，这些结构受损或松弛时，可以引起子宫脱垂。子宫内膜即黏膜，由上皮(属单层柱状上皮，有分泌细胞和纤毛细胞二种)和固有膜(由结缔组织构成，其内有大量的星形细胞，称为基质细胞)组成，子宫内膜可分为浅表的功能膜和深部的基底层，功能层较厚，约占内膜厚度的4/5；基底层较薄较致密，约占1/5，功能层可剥脱，而基底层不可剥脱。子宫内膜上皮细胞主要功能：①子宫内膜亦称子宫黏膜，是指构成哺乳类子宫内壁的一层；②子宫内膜对动情素和孕激素都起反应，因此可随着性周期(发情周期、月经周期)发生显著的变化。子宫内膜与胚胎附植密切相关，在生殖生理的研究中占重要地位。在胚胎与母体“对话"的过程中，子宫内膜上皮细胞充当了极其重要的角色。子宫内膜构成雌性哺乳动物子宫壁的内层，位于子宫腔面，在动物生殖生理活动中占有重要地位。子宫和子宫内膜是维持雌性动物生理功能和生育能力的重要器官，子宫内膜的再生修复是子宫的重要生理功能。体外培养的子宫内膜上皮细胞对于研究其生理功能、药物作用以及各种致病因素作用下的病理生理改变具重要意义。 |
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ(2-5μg/cm2)
培养基：含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等
换液频率：每2-3天换液一次
传代比例：1:2
消化液：0.25%胰蛋bai酶
培养条件：气相：空气，95%；CO2，5%
原代细胞实验步骤：
一、取7-10d雄性SD大鼠，颈椎脱臼处死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。
二、在超净工作台中，将大鼠断头置于玻璃培养皿中，打开颅腔后取出全脑,放在盛有预冷的PBS玻璃培养皿中，去除小脑和间脑。
三、将大脑半球在干滤纸上缓慢滚动以去除软脑膜和脑膜大血管，再放在新的盛有预冷的PBS玻璃培养皿中。
四、用细解剖镊去除大脑白质、残余大血管和软脑膜，保留大脑皮质。
五、大脑皮质放于DMEM中，剪碎成约1mm3大小，放入50ml的离心管中，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型胶原酶，0 .025-0 .05％IV型胶原酶，200-400U DNaseI)，混匀后37℃水浴消化1-1.5h。
六、室温1 000×g离心8min，去上清液。
七、沉淀中加入20％BSA重悬浮，充分混匀，1 000×g，20min，4℃离心，去上清。
八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的胶原酶/分散酶，0.05-0.1％I型胶原酶，100-300U DNaseI )重悬浮，混匀，37℃水浴消化0.5-1h，700×g室温离心6min，去上清液。
九、沉淀加入2ml DMEM培养液悬浮混匀，铺于经离心形成连续梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g，60min，4℃)，1000×g，4℃离心10min。
十、靠近底部的红细胞层之上的白黄色的层面即为纯化的微血管段，吸出后DMEM
漂洗两次(离心1000×rpm，6min，室温)，去上清液。
加入DMEM培养液(20％FBS，4ug/ml嘌呤霉素 )重悬浮，接种于含5％的大鼠 血清37℃孵育过夜所制备的细胞培养皿中，置于37℃、5％CO2培养箱内静置培养24h后更换不含嘌呤霉素的混合培养基，随后隔天换液。
原代细胞使用方法：
是一种贴壁细胞，细胞形态呈上皮细胞样，在技术部标准操作流程下，细胞可传2-3代；建议您收到细胞后尽快进行相关实验。
客户收到细胞后，请按照以下方法进行操作。
1. 取出T25细胞培养瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4h，以稳定细胞状态。
2. 贴壁细胞消化
1)吸出T25细胞培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次；
2)添加0.25%消化液1mL至T25培养瓶中，轻微转动培养瓶至消化液覆盖整个培养瓶底后，吸出多余消化液，37℃温浴1-3min；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后，再加入5ml培养基终止消化；
3)用吸管轻轻吹打混匀，按传代比例接种T25培养瓶传代，然后补充新鲜的培养基至5mL，置于37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养；
4)待细胞贴壁后，培养观察；之后按照换液频率更换新鲜的培养基。
3. 细胞收货脱落
1)收集所有细胞悬液，1000rpm，离心5min，保留沉淀；
2)添加0.25%消化液0.5mL至离心管中，重悬沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱静置5-7min)；消化完向离心管内加入5ml培养基终止消化；
3)经1000rpm，离心5min，丢弃上清，用5ml培养基重悬沉淀，接种于新的培养瓶内；
4)待细胞贴壁后，培养观察；之后按照换液频率更换新鲜的培养基(37℃预热)。
5)原瓶内贴壁细胞按正常消化处理。
4. 细胞实验
因原代细胞贴壁特殊性，贴壁的原代细胞在消化后转移至其他实验器皿（如玻璃爬片、培养板、共聚焦培养皿等）时，需要对实验器皿进行包被，以增强细胞贴壁性，避免细胞因没贴好影响实验；包被条件常选用鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚赖氨酸PLL（0.1mg/ml），明胶（0.1%），依据细胞种类而定。悬浮/半悬浮细胞无需包被。
公司正在出售的产品：
小鼠杂交瘤细胞株；3D-2A10-IgA
小鼠杂交瘤细胞株；HBNV2
小鼠杂交瘤细胞株；HBsAg-5H2
小鼠杂交瘤细胞株；3D5
小鼠杂交瘤细胞株；VP13-6G10
小鼠杂交瘤细胞株；VP13-3C11
小鼠杂交瘤细胞株；5E4G5
叙利亚仓鼠肾细胞系；BHK-21CIAPIN1+
小鼠杂交瘤细胞株；LB_001
小鼠杂交瘤细胞株；JF-IgD
小鼠杂交瘤细胞株；5D2F2
小鼠杂交瘤细胞株；WSSV-K1
小鼠杂交瘤细胞株；WSSV-K2
小鼠杂交瘤细胞株；Ss-IgM
胃癌耐药细胞株；BGC823/
PPLO Broth
支原体肉汤培养基
Mycoplasma Broth Medium
支原体肉汤培养基（不含琼脂和酚红）
Mycoplasma Broth Medium
支原体琼脂培养基（含精氨）
Mycoplasma Agar Base
PPLO琼脂
PPLO Agar
支原体半流培养基
兔子宫内膜上皮细胞Mycoplasma Semi-fluid Medium
美国药典培养基（USP标准）
液体大豆酪蛋白消化物培养基
SoybeanCasein Digest Medium
盐琼脂培养基
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