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详细介绍
商品属性：
产品名称 | |
检测方法 | 紫外分光光度法 |
产品规格 | 50管/48样 |
产品货号 | AS6321147 |
商品介绍：
测定意义： CA是线粒体三羧酸循环的第一个中间产物，由柠檬酸合酶催化乙酰CoA与草酰乙酸合成，其含量是三羧酸循环强度的主要指标之一。 配合测定丙酮酸含量、丙酮酸脱氢酶活性、乙酰CoA含量、柠檬酸合酶活性和CA含量，其中（1）丙酮酸含量和丙酮酸脱氢酶活性变化可以反映糖酵解进行程度，（2）综合分析丙酮酸含量、丙酮酸脱氢酶活性和乙酰CoA含量变化可以反映脂肪酸β-氧化途径提供的乙酰CoA情况，（3）乙酰CoA含量、柠檬酸合酶活性和CA含量变化可以反映三羧酸循环进行状况。 测定原理： CA在柠檬酸裂解酶的作用下，生成α-酮酸（草酰乙酸）；在弱酸性条件下，α-酮酸进一步与苯肼反应，生成相应的α-酮酸苯腙；α-酮酸苯腙在330nm处有吸收峰，该波长下吸光度的变化程度可反映出CA的含量。 自备仪器和用品： 可见分光光度计、水浴锅、可调式移液枪、1mL石英比色皿、研钵和蒸馏水。 |
试剂的组成和配制：
酸性提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存；碱性提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存；试剂一：液体10 mL×1瓶，4℃保存；试剂二：液体3 mL×1瓶，4℃保存；试剂三：粉剂×1瓶，-20 ℃保存，用时加入3mL蒸馏水，混匀，用不完的试剂4℃保存一周；试剂四：粉剂×1瓶，4 ℃保存，用时加入3mL蒸馏水，混匀，用不完的试剂4℃保存一周；试剂五：液体3.6mL×1瓶，4 ℃保存；试剂六：液体30mL×1瓶，4 ℃保存；试剂七：液体50mL×1瓶，4 ℃保存。
自备仪器和用品：
可见分光光度计、台式离心机、移液器、1 ml玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
NAD+和NADH的提取：
1、血清（浆）中NAD+和NADH的提取 NAD+的提取：按照血清（浆）体积（ml）：酸性提取液体积（ml）为1：5~10的比例（建 议取约0.1ml血清（浆），加入1ml酸性提取液），95℃水浴5min（盖紧，以防止水分散失）； 冰浴中冷却后，10000g 4 ℃离心10min；取500μl上清液，加入500μl碱性提取液使之中 和，混匀，10000g 4 ℃离心10min，取上清，置冰上待测。 NADH的提取：按照血清（浆）体积（ml）：碱性提取液体积（ml）为1：5~10的比例（建 议取约0.1ml血清（浆），加入1ml碱性提取液），95℃水浴5min（盖紧，以防止水分散失）； 冰浴中冷却后，10000g 4 ℃离心10min；取500μl上清液，加入500μl酸性提取液使之中 和，混匀，10000g 4 ℃离心10min，取上清，置冰上待测。 | 2、组织中NAD+和NADH的提取： NAD+的提取：按照组织质量（g）：酸性提取液体积（ml）为1：5~10的比例（建议取约0.1g 组织，加入1ml酸性提取液），冰浴研磨，95℃水浴5min（盖紧，以防止水分散失）；冰浴 中冷却后，10000g 4 ℃离心10min；取500μl上清液，加入500μl碱性提取液使之中和，混匀，10000g 4 ℃离心10min，取上清，置冰上待测。 NADH的提取：按照组织质量（g）：碱性提取液体积（ml）为1：5~10的比例（建议取约0.1g 组织，加入1ml碱性提取液），冰浴研磨，95℃水浴5min（盖紧，以防止水分散失）；冰浴 中冷却后，10000g 4 ℃离心10min；取500μl上清液，加入500μl酸性提取液使之中和， 混匀，10000g 4 ℃离心10min，取上清，置冰上待测。 | 3、细胞或细菌中NAD+和NADH的提取： NAD+的提取：先收集细胞或细菌到离心管内，弃上清，按照细菌或细胞数量（104个）：酸性 提取液体积（ml）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1ml酸性提取液）， 超声波破碎（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次），95℃水浴5min （盖紧，以防止水分散失）；冰浴中冷却后，10000g 4 ℃离心10min；取500μl上清液，加 入500μl碱性提取液使之中和，混匀，10000g 4 ℃离心10min，取上清，置冰上待测。 NADH的提取：先收集细胞或细菌到离心管内，弃上清，按照细菌或细胞数量（104个）：碱 性提取液体积（ml）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1ml碱性提取液）， 超声波破碎（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次），95℃水浴5min （盖紧，以防止水分散失）；冰浴中冷却后，10000g 4 ℃离心10min；取500μl上清液，加 入500μl酸性提取液使之中和，混匀，10000g 4 ℃离心10min，取上清，置冰上待测。 |
ADH测定操作：
1. 分光光度计预热30 min，调节波长到340 nm，蒸馏水调零。
2. 试剂二在25℃水浴中保温30 min。
3. 空白管：在1mL石英比色皿中依次加入100μL蒸馏水、800μL试剂二和100μL试剂四，迅速混匀后于340nm测定吸光值变化，分别记录15s和75s时吸光值，分别记为A1和A2。△A空白管=A1-A2。。
4. 测定管：在1mL石英比色皿中依次加入100μL上清液、800μL试剂二和100μL试剂四，迅速混匀后于340nm测定吸光值变化，分别记录15s和75s时吸光值，分别记为A3和A4。△A测定管=A3-A4。
注意：空白管只需测定一次。
注意事项：
①加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
②使用干净的塑料容器配置洗涤液。
③按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
④底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。
⑤洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
⑥使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器 。
⑦实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
⑧试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
⑨不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。
百合（标准品）英文名： Lithium citrate, tetrahydrate红膜蛋白4.2抗体包装100g
百两金A（标准品）英文名： MU-Gal转录因子ELYS蛋白抗体包装25g
百秋李(标准品)英文名： MU-GLU内皮粘蛋白EMCN抗体包装500g
百蕊草（标准品）英文名： MUP, disodium salt, trihydrate调节鸟核苷交换因子1抗体包装25g
百蕊草I/山柰-3-葡萄糖鼠李糖苷/阿福豆苷(标准...英文名： POPOP磷化转录因子E2F1抗体包装5g
柏子仁（标准品）英文名： PPO上皮特异性转录因子1抗体包装100g
败酱草（标准品）英文名： Sodium glycolate内皮2抗体包装25g
斑蝥（标准品）英文名： Span* 60内皮受体蛋白酪激B3抗体包装1g
板蓝根（标准品）英文名： Titanium (IV) oxide软骨外胚层发育不良相关蛋白抗体包装250mg
半边莲（标准品）英文名： Triton X-405髓鞘蛋白P0样蛋白2抗体包装5g
半甘草异黄B英文名： Urinary trypsin inhibitor fragment雌激受体α抗体包装25MG
半夏（标准品）英文名： Zinc oxide内质网核信号转导蛋白2抗体包装1g
半枝莲（标准品）英文名： 4(5)-Methylimidazole锌指蛋白521抗体包装250mg
宝藿苷I,羊藿次苷II(标准品）英文名： Aluminum hydroxide大肠杆菌埃希杆菌O6抗体（肠致病性大肠杆菌O6）包装5g
宝藿苷II；大花羊藿苷A；意瑞苷A(标准品)英文名： Ammonium phosphate, tribasic , trihydrate植物延展-β包装100mg
酿酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 质量规格：总含量>95% ,进分痘带状疱疹病IgG试剂盒瑞香;7,8-Dihydroxycou
荧光假单胞菌Pseudomonas│fluorescens 质量规格：>98%;NK1受体拮抗剂双氢睾试剂盒肉桂;Cinnamyl alcohol
围小从壳Glomerella│cingulata (Stoneman) Spauld. & H. Schrenk 质量规格：>98%,BR衰变加速因子试剂盒肉桂;Cinnamaldehyde
线粒体柠檬酸(MCA）含量测试盒50管/48样麦芽糖假丝酵母 4-氮杂可溶性CD40分子Elisa
新月弯孢 Boc-5-氨基戊酸γ氨基丁酸受体Elisa
黄孢平革 2-乙酰基噻唑粘蛋白5B抗体Elisa
腐皮壳 磷酸一水合物磷酸二酯3AElisa
弗雷德里克斯堡假单胞 耐晒猩红RC钩端螺旋体Elisa
不吸水链霉 九氟戊酸兰尼碱受体3Elisa
寄生孢 D-谷二甲酯盐酸盐6磷酸葡萄糖Elisa
巨大曲霉 2-溴-5-甲酯5磷酸核酮糖Elisa
禾粘座孢霉（或禾漆斑） N,N-二异酰甲壳质蛋白40Elisa
盐水盐土生古 (R)-2-羟基-3-苯基酸甲酯氨基酸Elisa
猪丹丝 8-溴-1-辛烯嗜TI型病Elisa
栗疫 4-羟基苯酸频哪酯阿伯糖苷Elisa
波恩佩岛苍黄色杆 D-2,4-二氨基丁酸ZDNA结合蛋白1Elisa
木霉 5--2-甲RAS癌基因家族Elisa
胶孢 异壬酸天门冬氨基转移Elisa
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