化工仪器网
详细介绍
商品属性：
产品名称 | |
检测方法 | 可见分光光度法 |
产品规格 | 50管/24样 |
产品货号 | AS63212 |
商品介绍：
测定意义 NADK（EC 2.7.1.23）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是目前所发现的生物体内惟一能够催化NAD+磷酸化生成NADP+的酶，可催化NAD(H)以ATP或无机多聚磷酸[poly(P)]作为磷酰基供体进行磷酸化反应，生成NADP(H)。因此，NAD激酶在合成NADP(H)以及调节NAD(H)与NADP(H)的平衡上具有重要作用。 测定原理 NADK催化NAD+磷酸化，生成NADP+；NADP+可被6-磷酸葡萄糖脱氢酶还原为NADPH；NADPH通过PMS的递氢作用，还原氧化型噻唑蓝（MTT），通过在600 nm下测定MTT的还原速度（吸光值的变化）可反映出NADK活性的大小。 需自备的仪器和用品 可见分光光度计、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL玻璃比色皿和蒸馏水。 |
试剂的组成和配制：
酸性提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存；碱性提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存；试剂一：液体10 mL×1瓶，4℃保存；试剂二：液体3 mL×1瓶，4℃保存；试剂三：粉剂×1瓶，-20 ℃保存，用时加入3mL蒸馏水，混匀，用不完的试剂4℃保存一周；试剂四：粉剂×1瓶，4 ℃保存，用时加入3mL蒸馏水，混匀，用不完的试剂4℃保存一周；试剂五：液体3.6mL×1瓶，4 ℃保存；试剂六：液体30mL×1瓶，4 ℃保存；试剂七：液体50mL×1瓶，4 ℃保存。
自备仪器和用品：
可见分光光度计、台式离心机、移液器、1 ml玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
NAD+和NADH的提取：
1、血清（浆）中NAD+和NADH的提取 NAD+的提取：按照血清（浆）体积（ml）：酸性提取液体积（ml）为1：5~10的比例（建 议取约0.1ml血清（浆），加入1ml酸性提取液），95℃水浴5min（盖紧，以防止水分散失）； 冰浴中冷却后，10000g 4 ℃离心10min；取500μl上清液，加入500μl碱性提取液使之中 和，混匀，10000g 4 ℃离心10min，取上清，置冰上待测。 NADH的提取：按照血清（浆）体积（ml）：碱性提取液体积（ml）为1：5~10的比例（建 议取约0.1ml血清（浆），加入1ml碱性提取液），95℃水浴5min（盖紧，以防止水分散失）； 冰浴中冷却后，10000g 4 ℃离心10min；取500μl上清液，加入500μl酸性提取液使之中 和，混匀，10000g 4 ℃离心10min，取上清，置冰上待测。 | 2、组织中NAD+和NADH的提取： NAD+的提取：按照组织质量（g）：酸性提取液体积（ml）为1：5~10的比例（建议取约0.1g 组织，加入1ml酸性提取液），冰浴研磨，95℃水浴5min（盖紧，以防止水分散失）；冰浴 中冷却后，10000g 4 ℃离心10min；取500μl上清液，加入500μl碱性提取液使之中和，混匀，10000g 4 ℃离心10min，取上清，置冰上待测。 NADH的提取：按照组织质量（g）：碱性提取液体积（ml）为1：5~10的比例（建议取约0.1g 组织，加入1ml碱性提取液），冰浴研磨，95℃水浴5min（盖紧，以防止水分散失）；冰浴 中冷却后，10000g 4 ℃离心10min；取500μl上清液，加入500μl酸性提取液使之中和， 混匀，10000g 4 ℃离心10min，取上清，置冰上待测。 | 3、细胞或细菌中NAD+和NADH的提取： NAD+的提取：先收集细胞或细菌到离心管内，弃上清，按照细菌或细胞数量（104个）：酸性 提取液体积（ml）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1ml酸性提取液）， 超声波破碎（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次），95℃水浴5min （盖紧，以防止水分散失）；冰浴中冷却后，10000g 4 ℃离心10min；取500μl上清液，加 入500μl碱性提取液使之中和，混匀，10000g 4 ℃离心10min，取上清，置冰上待测。 NADH的提取：先收集细胞或细菌到离心管内，弃上清，按照细菌或细胞数量（104个）：碱 性提取液体积（ml）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1ml碱性提取液）， 超声波破碎（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次），95℃水浴5min （盖紧，以防止水分散失）；冰浴中冷却后，10000g 4 ℃离心10min；取500μl上清液，加 入500μl酸性提取液使之中和，混匀，10000g 4 ℃离心10min，取上清，置冰上待测。 |
ADH测定操作：
1. 分光光度计预热30 min，调节波长到340 nm，蒸馏水调零。
2. 试剂二在25℃水浴中保温30 min。
3. 空白管：在1mL石英比色皿中依次加入100μL蒸馏水、800μL试剂二和100μL试剂四，迅速混匀后于340nm测定吸光值变化，分别记录15s和75s时吸光值，分别记为A1和A2。△A空白管=A1-A2。。
4. 测定管：在1mL石英比色皿中依次加入100μL上清液、800μL试剂二和100μL试剂四，迅速混匀后于340nm测定吸光值变化，分别记录15s和75s时吸光值，分别记为A3和A4。△A测定管=A3-A4。
注意：空白管只需测定一次。
注意事项：
①加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
②使用干净的塑料容器配置洗涤液。
③按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
④底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。
⑤洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
⑥使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器 。
⑦实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
⑧试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
⑨不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。
粘蛋白/粘液1(MUC1)英文名：MUC1 ELISA Kit血管生成相关蛋白6抗体包装1g
再生基因蛋白1a(REG-1a)英文名：REG-1a ELISA KitMuellerian缪勒管激抑制因子抗体包装5g
载脂蛋白H(Apo-H)英文名：Apo-H ELISA Kit酪蛋白激受体A8抗体包装1g
载脂蛋白E(Apo-E)英文名：Apo-E ELISA Kit脂肪酰家族成员1抗体包装5g
载脂蛋白B48(apo-B48)英文名：apo-B48 ELISA Kit芳香烃受体核转录蛋白样2抗体包装100mg
载脂蛋白B100(apo-B100)英文名：apo-B100 ELISA Kit磷化芳香N-乙酰化转移抗体包装1g
载脂蛋白B100(Apo B100)英文名：Apo B100 ELISA Kit肌动蛋白结合蛋白1抗体包装500mg
载脂蛋白B(ApoB)英文名：ApoB ELISA Kit粘附分子IgG样结构域蛋白2抗体包装5g
载脂蛋白A5(apo-A5)英文名：apo-A5 ELISA Kit肌动蛋白结合蛋白DOC6抗体包装100mg
载脂蛋白A1(apo-A1)英文名：apo-A1 ELISA KitAFG3样蛋白2/脊髓小脑共济失调蛋白28抗体包装500mg
载脂蛋白A1(Apo A1)英文名：Apo A1 ELISA Kit激活受体相互作用蛋白1抗体包装1g
孕受体(PROGR)英文名：PROGR ELISA Kit固类还原家族7成员A2抗体包装5g
孕(PROG)英文名：PROG ELISA Kit蛋白激AKT1,2,3抗体包装25g
孕激/孕(PROG)英文名：PROG ELISA Kit帕金森病相关蛋白ATP13A2抗体包装5g
诱导型一氧化合成(iNOS)英文名：iNOS ELISA Kit肌侧索硬化蛋白2抗体包装100g
缪勒激2型受体抗体Ⅱ型胶原(COL2)AT-406 是一种有效的，可口服的 Smac 模拟物，为 IAPs 的拮抗剂，能够抑制 XIAP，cIAP1 和 cIAP2 蛋白，Ki 值分别为 66.4，
NAD激酶（NADK）测试盒50管/24样空泡单胞 N-2-乙酰基鸟Ⅰ型前胶原羧基端肽Elisa
都柏林沙门氏 肝琼脂糖凝胶CL-6BⅡ型肺泡表面抗原Elisa
毕赤酵母属 聚氧乙烯氢化Ⅱ型胶原C端肽Elisa
枯草芽孢杆 (-)-莰Ⅱ型胶原抗体Elisa
肉座属 牛肉浸粉Ⅲ型胶原蛋白Elisa
少根根霉 油酸乙酯Ⅲ型前胶原氨基端肽Elisa
大肠埃希氏○抗原微量凝集定型血清诊断液 ○106 3'-甲氧基-5'-羟基异黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷Ⅳ型胶原Elisa
酿酒酵母 Ⅳ型胶原蛋白Elisa
壳多胞属 鼠尾草酸Elisa
粗壮假丝酵母 蜂胶Ⅸ型胶原蛋白Elisa
运动节杆 甲基紫精adropinElisa
枯草芽孢杆 月桂聚氧乙烯硫酸钠AKT蛋白Elisa
Pseudomonas argentinensis DA201-C树脂AP2A2Elisa
马腺疫链球兽疫亚种 1，1-二苯基-2-苦基肼脂肪炎症因子Elisa
枯草芽孢杆 长春apelin 12Elisa
化工仪器网