Laemmli加样缓冲液

Laemmli加样缓冲液公司正在销售的产品：Anti-TBX3 Antibody大鼠
Anti-TCEAL1 Antibody人军团抗原
Anti-TBXT Antibody人大肠素
Anti-TCEAL3 Antibody大鼠白活化黏附因子
Anti-TCEAL4 Antibody人腺病抗原
Anti-TCF3 Antibody大鼠白介素9
Anti-TCF4 Antibody大鼠巨噬

公司产品仅用于科研具有质量可靠、效果稳定、灵敏度高、操作简单、易保存等特点，咨询并订购！

产品分类：蛋白电泳

储存条件：4℃,12个月

用途：变性不连续PAGE，蛋白加样缓冲液

注意事项：主要SDS、氧化剂、溴酚蓝等组成。

 

 

配制与标定的实验原理：

1、用EDTA二钠盐配制EDTA标准溶液的原因；

EDTA是四元酸，是一种白色晶体粉末，常用H4Y表示，溶解度很小，室温溶解度为0.02g/100g H2O。

2、标定EDTA标准溶液的工作基准试剂，基准试剂的预处理：称量前一般应先用稀盐酸洗去氧化层，然后用水洗净，烘干。

配制步骤：

1、取适量锌片放在100mL烧杯中，用0.1mol·L-1 HCl溶液（自配）清洗1min，再用自来水、纯水洗净，烘干、冷却。

2、用直接称量法在干燥小烧杯中准确称取0.15～0.2g Zn，盖好小表面皿。

3、用滴管从烧杯口加入5mL 1:1 盐酸，待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁，小心地将溶液转移至250mL容量瓶中，用纯水稀释至标线，摇匀。

 

 

实验方法与判定：

1.对照品溶液的稳定性

2.对照品溶液的配制：精密量取脑对照品适量，加无水乙醇制成每1ml含脑1mg的溶液，作为对照品溶液。

3.色谱条件：以交联键合聚乙二醇为固定相的毛细管柱；柱温120℃；进样口温度250℃；检测器温度250℃；分流进样，分流比10:1。理论塔板数按脑计算应不低于10000。

4.实验方法：配制的对照品溶液，一份置冷处保存，一份置室温中保存，在第1、3、7、10、15天重新配制一份对照品溶液，三种储备液同时稀释制成每1ml中约含50ug的溶液。照气相色谱法，并依据新对照品的峰面积计算原对照品溶液的含量。记录下来，保证原对照品溶液含量在考察期相对平均偏差不超过2.0%，验证对照品溶液在使用期内稳定可靠。

金乳牛肝菌猪繁殖与呼吸综合征/猪蓝耳病病抗体Anti-BAG3 Antibodyγ肽(Pγ)

澳型核果褐腐病菌凋亡相关蛋白10抗体Anti-BAG1 Antibodyγ谷酰转移(GGT)

澳型核果褐腐病菌钙调蛋白依赖性蛋白激磷抗体Anti-BAG1 Antibodyγ-谷酰环化转移(GGCT)

门多萨假单胞菌丝/苏蛋白激PIM3抗体Anti-BAG5 Antibodyγ谷酰半胱合成(γ-ECS)

蜡样芽孢杆菌组蛋白精甲基转移5抗体Anti-BAG5 Antibodyγ谷-半胱合成(γ-GCS)

热带假丝酵母原钙粘附蛋白11X抗体Anti-BAG3 Antibodyγ干扰诱导蛋白16/p16(IFI16/p16)

粉红聚端孢霉原钙粘附蛋白11Y抗体Anti-BAK(BAK1) Antibodyγ干扰诱导单核因子(MIGF/CXCL9)

暗褐色毛霉原钙粘附蛋白12/血管内皮钙粘蛋白2抗体Anti-BAG6 Antibodyγ干扰受体(IFN-γR)

枯草芽孢杆菌原钙粘附蛋白17抗体Anti-BAP1 Antibodyγ干扰(IFN-γ)

三叶草根瘤菌原钙粘附蛋白1抗体Anti-BAX Antibodyγ干扰(IFNγ)

杰丁毕赤酵母原钙粘附蛋白α1抗体Anti-BAK1 Antibodyγ分泌激活蛋白(PION)

深红原钙粘附蛋白α3抗体Anti-BAMBI Antibodyγ基丁(GABA)

金龟子绿僵菌原钙粘附蛋白α4抗体Anti-BAX Antibodyβ-转导重复序列包含蛋白(BTRC)

短乳杆菌原钙粘附蛋白α5抗体Anti-BAX Antibodyβ抑制蛋白2(ARRB2)

发酵假丝酵母原钙粘附蛋白α9抗体Anti-BAX Antibodyβ血小板球蛋白/β血栓环蛋白(β-TG)

侧毛壳原钙粘附蛋白α7抗体Anti-BAX Antibodyβ血小板球蛋白(β-TG)

链霉菌Streptomyces│sp. 质量规格：HPLC>98%,标准品,还原型

巴斯德毕赤酵母Pichia│pastoris 质量规格：纯度大于98%,BR

干酪乳杆菌假植物亚种Lactobacillus│casei subsp .pseudoplantarum 质量规格：>99%,BR
Laemmli加样缓冲液Plant Vitamin D2,VD2 ELISA Kit   植物维生suD2规格： 48T

Plant Vitamin D3,VD3 ELISA kit   植物维生suD3规格： 48T

Plant Vitamin D,VD ELISA Kit   植物维生suD规格： 48T

Plant Vitamin B6,VB6 ELISA Kit   植物维生suB6规格： 48T

Plant 25-Dihydroxy vitamin D3,HVD3 ELISA Kit   植物25羟基维生suD3规格： 48T

使用方法：

1.  常用筛选浓度

注意：用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型，培养基，生长条件和细胞代谢率而变化，推荐使用浓度为50-1000μg/mL。对于第一次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线（kill curve），即剂量反应性曲线，来确定最佳筛选浓度。

一般而言，哺乳动物细胞50-500μg/mL；细菌/植物细胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。

2. 杀灭曲线的建立

注意：为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株，需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素浓度，可通过建立杀灭曲线（剂量反应曲线）来实现，至少选择5个浓度。

1）  第一天：未转化的细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上，37℃，CO2培养过夜；注：对于需要更高密度来检测活力的细胞，可增加接种量。

2）  根据细胞类型，设定合适范围内的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例，可设定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去离子水或者PBS buffer按照1:10的比例将母液稀释到5 mg/ml，然后按照下表稀释到相应浓度的工作液。

3）  第二天：替换旧的培养基，换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基。每个浓度做三个平行孔。

4）  接下来每3-4天更换新的含药物培养基。

5）  按照固定的周期（如每2天）进行活细胞计数来确定阻止未转染细胞生长的恰当浓度。选择在理想的天数（通常是7-10天）内能够杀死绝大多数细胞的浓度为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。

3.   稳定转染细胞的筛选

1）  转染48h后，用含有适当浓度的潮霉素B筛选培养基来传代细胞（直接传代或者稀释后传代）。

注意：细胞处于活跃分裂状态时抗生素的杀伤。则当细胞过于稠密，其效率会降低。为了得到较好的筛选效果，最好将细胞稀释至丰度不超过25%

2）  每隔3-4天更换含有药物的筛选培养液。

3）  筛选7天后观察并评估细胞克隆（集落）的形成情况。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间，这取决于宿主细胞类型，转染，以及筛选效果。

4）   挑取并转移5-10个抗性克隆于35mm细胞培养板，继续用含药物的筛选培养液维持培养7天。

5）   之后更换正常培养基培养即可。