详细介绍
试剂的组成和配制:
酸性提取液:液体50mL×1瓶,4℃保存;碱性提取液:液体50mL×1瓶,4℃保存;试剂一:液体10 mL×1瓶,4℃保存;试剂二:液体3 mL×1瓶,4℃保存;试剂三:粉剂×1瓶,-20 ℃保存,用时加入3mL蒸馏水,混匀,用不完的试剂4℃保存一周;试剂四:粉剂×1瓶,4 ℃保存,用时加入3mL蒸馏水,混匀,用不完的试剂4℃保存一周;试剂五:液体3.6mL×1瓶,4 ℃保存;试剂六:液体30mL×1瓶,4 ℃保存;试剂七:液体50mL×1瓶,4 ℃保存。
自备仪器和用品:
可见分光光度计、台式离心机、移液器、1 ml玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
商品介绍:
测定意义脱氢酶(dehydrogenase, DHA) 是一类催化物质氧化还原反应的酶,催化底物通过细胞色素系统被氧化,释放的能量供机体使用,是生物体取得能量的一种方式。测定原理在细胞呼吸过程中,氢受体2, 3, 5 - 氯化三苯基四氮唑(2,3,5-Triphenyl Tetrazolium Chloride, TTC)在脱氢酶作用下接受氢以后,被还原为三苯基甲鐟(Triphenyl Formazone, TF),TF呈现红色,于485nm测定其吸光值,即得脱氢酶活性。自备实验仪器及用品天平、恒温培养箱或水浴锅、低温离心机、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、冰、蒸馏水、甲醇(不允许快递,请用户自备)。 |
商品属性:
产品名称 | |
检测方法 | 可见分光光度法 |
产品规格 | 50管/48样 |
产品货号 | AS6321357 |
NAD+和NADH的提取:
1、血清(浆)中NAD+和NADH的提取 NAD+的提取:按照血清(浆)体积(ml):酸性提取液体积(ml)为1:5~10的比例(建 议取约0.1ml血清(浆),加入1ml酸性提取液),95℃水浴5min(盖紧,以防止水分散失); 冰浴中冷却后,10000g 4 ℃离心10min;取500μl上清液,加入500μl碱性提取液使之中 和,混匀,10000g 4 ℃离心10min,取上清,置冰上待测。 NADH的提取:按照血清(浆)体积(ml):碱性提取液体积(ml)为1:5~10的比例(建 议取约0.1ml血清(浆),加入1ml碱性提取液),95℃水浴5min(盖紧,以防止水分散失); 冰浴中冷却后,10000g 4 ℃离心10min;取500μl上清液,加入500μl酸性提取液使之中 和,混匀,10000g 4 ℃离心10min,取上清,置冰上待测。 | 2、组织中NAD+和NADH的提取: NAD+的提取:按照组织质量(g):酸性提取液体积(ml)为1:5~10的比例(建议取约0.1g 组织,加入1ml酸性提取液),冰浴研磨,95℃水浴5min(盖紧,以防止水分散失);冰浴 中冷却后,10000g 4 ℃离心10min;取500μl上清液,加入500μl碱性提取液使之中和,混匀,10000g 4 ℃离心10min,取上清,置冰上待测。 NADH的提取:按照组织质量(g):碱性提取液体积(ml)为1:5~10的比例(建议取约0.1g 组织,加入1ml碱性提取液),冰浴研磨,95℃水浴5min(盖紧,以防止水分散失);冰浴 中冷却后,10000g 4 ℃离心10min;取500μl上清液,加入500μl酸性提取液使之中和, 混匀,10000g 4 ℃离心10min,取上清,置冰上待测。 | 3、细胞或细菌中NAD+和NADH的提取: NAD+的提取:先收集细胞或细菌到离心管内,弃上清,按照细菌或细胞数量(104个):酸性 提取液体积(ml)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1ml酸性提取液), 超声波破碎(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次),95℃水浴5min (盖紧,以防止水分散失);冰浴中冷却后,10000g 4 ℃离心10min;取500μl上清液,加 入500μl碱性提取液使之中和,混匀,10000g 4 ℃离心10min,取上清,置冰上待测。 NADH的提取:先收集细胞或细菌到离心管内,弃上清,按照细菌或细胞数量(104个):碱 性提取液体积(ml)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1ml碱性提取液), 超声波破碎(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次),95℃水浴5min (盖紧,以防止水分散失);冰浴中冷却后,10000g 4 ℃离心10min;取500μl上清液,加 入500μl酸性提取液使之中和,混匀,10000g 4 ℃离心10min,取上清,置冰上待测。 |
ADH测定操作:
1. 分光光度计预热30 min,调节波长到340 nm,蒸馏水调零。
2. 试剂二在25℃水浴中保温30 min。
3. 空白管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL蒸馏水、800μL试剂二和100μL试剂四,迅速混匀后于340nm测定吸光值变化,分别记录15s和75s时吸光值,分别记为A1和A2。△A空白管=A1-A2。。
4. 测定管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL上清液、800μL试剂二和100μL试剂四,迅速混匀后于340nm测定吸光值变化,分别记录15s和75s时吸光值,分别记为A3和A4。△A测定管=A3-A4。
注意:空白管只需测定一次。
注意事项:
①加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
②使用干净的塑料容器配置洗涤液。
③按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
④底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
⑤洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
⑥使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器 。
⑦实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
⑧试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
⑨不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。
密苏里游动放线菌中心体肌动蛋白γ1/增强型PI3K蛋白抗体Human CPN2(Carboxypeptidase N2) ELISA Kit人胰岛样生长因子结合蛋白5(IGFBP-5)免疫试剂盒
大肠埃希氏菌分裂周期相关蛋白JPO2抗体Human CDKN1B(Cyclin Dependent Kinase Inhibitor 1B) ELISA Kit人胰岛样生长因子结合蛋白4(IGFBP-4)免疫试剂盒
类干酪乳杆菌半胱蛋白-2抗体Human IL-17 F(Interleukin 17F) ELISA Kit人胰岛样生长因子结合蛋白3(IGFBP-3)免疫试剂盒
管毛壳7号染色体开放阅读框63抗体Human Cr(Creatinine) ELISA Kit人胰岛样生长因子结合蛋白2(IGFBP2)免疫试剂盒
链霉菌属CD2结合蛋白3抗体Human TITF1(thyroid transcription factor 1) ELISA Kit人胰岛样生长因子结合蛋白1(IGFBP-1)免疫试剂盒
淡紫紫霉胶原三股螺旋重复蛋白1抗体Human α-Endorphin(alpha Endorphin) ELISA Kit人胰岛样生长因子2受体(IGF-2R)免疫试剂盒
黄色直丝链霉菌20号染色体开放阅读框72抗体Human TCEB2(Transcription elongation factor B polypeptide 2) ELISA Kit人胰岛样生长因子2(IGF-2)免疫试剂盒
黑木耳2号染色体开放阅读框6抗体Human ACY1(aminoacylase-1) ELISA Kit人胰岛样生长因子2 mRNA结合蛋白2(IGF2BP2)免疫试剂盒
假单胞菌CD318抗体Human SAT1(Diamine acetyltransferase 1) ELISA Kit人胰岛样生长因子1受体(IGF-1R)免疫试剂盒
短小芽孢杆菌着丝粒蛋白B抗体Human SH3BP2(SH3 Domain Binding Protein 2) ELISA Kit人胰岛样生长因子1(IGF-1)免疫试剂盒
秦氏蜜环菌1号染色体开放阅读框111抗体Human IFNA2(Inteferon alpha 2a) ELISA Kit人胰岛受体底物2(IRS-2)免疫试剂盒
Paraconiothyrium sp.19号染色体开放阅读框80抗体Human NENF(Neudesin) ELISA Kit人胰岛受体底物1(IRS1)免疫试剂盒
火木层孔菌半胱双加氧1抗体Human SCUBE2(Signal peptide, CUB and EGF-like domain-containing protein 2) ELISA Kit人胰岛受体β(ISR-β)免疫试剂盒
异常汉逊酵母胶原蛋白11A2抗体Human beta 1-ARA(beta 1 adrenergic receptor autoantibody) ELISA Kit人胰岛受体α(INSRA)免疫试剂盒
锗栓孔菌 (淡黄褐栓菌)CUL4B蛋白抗体Human Wnt6(Protein Wnt-6) ELISA Kit人胰岛降解(IDE)免疫试剂盒
德氏乳杆菌保加亚亚种1号染色体开放阅读框103抗体Human NEXN(Nexilin) ELISA Kit人胰岛(INS)免疫试剂盒
平滑假丝酵母Candida│parapsilosis 质量规格:>98%,BRG蛋白偶联胆汁受体1试剂盒2-金刚烷
叶点霉Phyllosticta│sp. 质量规格:>99%,BRG蛋白偶联雌激受体1试剂盒金刚烷
斯氏土地杆菌Pedobacter│steynii 质量规格:>99%,BRG蛋白偶合受体44试剂盒己烯雌
脱氢酶(DHA)测试盒50管/48样大肠埃希氏杆 2,5-二无翅型MMTV整合位点家族成员3aElisa
变金黄节杆 Boc-L-天冬-4-甲酯无翅型MMTV整合位点家族成员5aElisa
球孢白僵 10-(2-萘基)蒽-9-酸无翅型MMTV整合位点家族成员6Elisa
烟色红曲霉 三乙基硅烷五聚3Elisa
异型德克酵母 2,2-二甲基琥珀酸性T相关抗原4Elisa
镰孢霉 氢西酞胱硫γ裂解Elisa
肉座属 4-乙基-2,3-二氧-1-哌甲酰间粘附分子1Elisa
樟疫霉 碳酸钠,一水色CElisa
弗雷德里克斯堡假单胞 2,4-双(三氟甲基)苯甲色C氧化Elisa
谷棒杆 草酸钴,二水色P450Elisa
阮继生氏圣格奥尔根 甘罗溴色P4501A2Elisa
喜海水盐单胞 3-膦酸基酸色P4502E1Elisa
门多萨假单胞 2-乙酰基菲外信号调节激Elisa
库尔勒盐单胞 α-萘周期AElisa
粘质沙雷氏 2-乙酰-4-周期D1Elisa