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详细介绍
商品属性：
产品名称 | 磷脂酶D(PLD)测试盒50管/48样 |
检测方法 | 可见分光光度法 |
产品规格 | 50管/48样 |
产品货号 | AS6321192 |
商品介绍：
测定意义 磷脂酶D（EC3.1.4.4）即磷脂酰胆碱水解酶，是催化磷酸二酯键水解和碱基交换反应的一类酶的总称，广泛存在于高等动植物和细菌等多种生物体中，具有参与细胞脂质代谢、信号传导、生物膜形成的抗逆境胁等生理功能。 测定原理 磷脂酶D催化水解磷脂酰胆碱末端的磷脂酰二酯键生成磷脂酸和胆碱，胆碱在胆碱氧化酶催化作用下生成甜菜碱和过氧化氢，过氧化氢在过氧化氢酶的作用下将4-氨基安替bi林和重蒸酚氧化成粉红色物质，在500nm处有特征吸收峰。 自备实验用品及仪器 天平、研钵、超速冷冻离心机、可见分光光度计、1 mL玻璃比色皿、恒温水浴锅，无水乙醇。 |
试剂的组成和配制：
酸性提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存；碱性提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存；试剂一：液体10 mL×1瓶，4℃保存；试剂二：液体3 mL×1瓶，4℃保存；试剂三：粉剂×1瓶，-20 ℃保存，用时加入3mL蒸馏水，混匀，用不完的试剂4℃保存一周；试剂四：粉剂×1瓶，4 ℃保存，用时加入3mL蒸馏水，混匀，用不完的试剂4℃保存一周；试剂五：液体3.6mL×1瓶，4 ℃保存；试剂六：液体30mL×1瓶，4 ℃保存；试剂七：液体50mL×1瓶，4 ℃保存。
自备仪器和用品：
可见分光光度计、台式离心机、移液器、1 ml玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
NAD+和NADH的提取：
1、血清（浆）中NAD+和NADH的提取 NAD+的提取：按照血清（浆）体积（ml）：酸性提取液体积（ml）为1：5~10的比例（建 议取约0.1ml血清（浆），加入1ml酸性提取液），95℃水浴5min（盖紧，以防止水分散失）； 冰浴中冷却后，10000g 4 ℃离心10min；取500μl上清液，加入500μl碱性提取液使之中 和，混匀，10000g 4 ℃离心10min，取上清，置冰上待测。 NADH的提取：按照血清（浆）体积（ml）：碱性提取液体积（ml）为1：5~10的比例（建 议取约0.1ml血清（浆），加入1ml碱性提取液），95℃水浴5min（盖紧，以防止水分散失）； 冰浴中冷却后，10000g 4 ℃离心10min；取500μl上清液，加入500μl酸性提取液使之中 和，混匀，10000g 4 ℃离心10min，取上清，置冰上待测。 | 2、组织中NAD+和NADH的提取： NAD+的提取：按照组织质量（g）：酸性提取液体积（ml）为1：5~10的比例（建议取约0.1g 组织，加入1ml酸性提取液），冰浴研磨，95℃水浴5min（盖紧，以防止水分散失）；冰浴 中冷却后，10000g 4 ℃离心10min；取500μl上清液，加入500μl碱性提取液使之中和，混匀，10000g 4 ℃离心10min，取上清，置冰上待测。 NADH的提取：按照组织质量（g）：碱性提取液体积（ml）为1：5~10的比例（建议取约0.1g 组织，加入1ml碱性提取液），冰浴研磨，95℃水浴5min（盖紧，以防止水分散失）；冰浴 中冷却后，10000g 4 ℃离心10min；取500μl上清液，加入500μl酸性提取液使之中和， 混匀，10000g 4 ℃离心10min，取上清，置冰上待测。 | 3、细胞或细菌中NAD+和NADH的提取： NAD+的提取：先收集细胞或细菌到离心管内，弃上清，按照细菌或细胞数量（104个）：酸性 提取液体积（ml）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1ml酸性提取液）， 超声波破碎（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次），95℃水浴5min （盖紧，以防止水分散失）；冰浴中冷却后，10000g 4 ℃离心10min；取500μl上清液，加 入500μl碱性提取液使之中和，混匀，10000g 4 ℃离心10min，取上清，置冰上待测。 NADH的提取：先收集细胞或细菌到离心管内，弃上清，按照细菌或细胞数量（104个）：碱 性提取液体积（ml）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1ml碱性提取液）， 超声波破碎（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次），95℃水浴5min （盖紧，以防止水分散失）；冰浴中冷却后，10000g 4 ℃离心10min；取500μl上清液，加 入500μl酸性提取液使之中和，混匀，10000g 4 ℃离心10min，取上清，置冰上待测。 |
ADH测定操作：
1. 分光光度计预热30 min，调节波长到340 nm，蒸馏水调零。
2. 试剂二在25℃水浴中保温30 min。
3. 空白管：在1mL石英比色皿中依次加入100μL蒸馏水、800μL试剂二和100μL试剂四，迅速混匀后于340nm测定吸光值变化，分别记录15s和75s时吸光值，分别记为A1和A2。△A空白管=A1-A2。。
4. 测定管：在1mL石英比色皿中依次加入100μL上清液、800μL试剂二和100μL试剂四，迅速混匀后于340nm测定吸光值变化，分别记录15s和75s时吸光值，分别记为A3和A4。△A测定管=A3-A4。
注意：空白管只需测定一次。
注意事项：
①加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
②使用干净的塑料容器配置洗涤液。
③按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
④底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。
⑤洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
⑥使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器 。
⑦实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
⑧试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
⑨不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。
伪金丝桃英文名： D-Ribose 5-phosphate disodium salt hydrate组受体H1抗体包装1g
伪原(标准品)英文名： Hematoxylin同源盒蛋白HOXA9抗体包装5g
委陵菜（标准品）英文名： Adenosine 5‘-monophosphate sodium salt同源盒蛋白HOXB5抗体包装1g
卫矛碱英文名： CTP.Na2肝粘附分子抗体包装25g
文多灵(标准品）英文名： 5-Methyluridine磷化组蛋白去乙酰化5抗体包装5g
乌金苷（标准品）英文名： 2,2'-O-Cyclouridine磷化组蛋白去乙酰化1抗体包装5g
乌灵菌粉（标准品）英文名： X-gal磷化组蛋白去乙酰化2抗体包装1g
乌梅（标准品）英文名： Fluorescamine磷化HOMER3蛋白抗体包装25g
乌梢蛇（标准品）英文名： 4-Chloro-1-naphthol (4-CN)转化蛋白p21抗体（原癌基因H-ras抗体）包装5g
（标准品）英文名： Avidin from egg white转录因子HES-1抗体包装100g
英文名： Streptavidin from Streptomyces avidinii组蛋白H4-K4基转移抗体包装25g
内酯（标准品）英文名： Sitafloxacin HydrateHOMER3蛋白抗体包装5g
内酯英文名： DHBS磷化HER3受体抗体包装10KU
乌贼墨（标准品）英文名： Disodium beta-glycerophosphate pentahydrate磷化HER4抗体包装250mg
吴茱萸（标准品）英文名： Fura 2-AM磷化HER4抗体包装100g
芽孢杆菌Bacillus│sp. 质量规格：>95%,BR免白M试剂盒血平;Alserin
AS3.381资源名称: 米曲霉 质量规格：>98%,BR免疫球蛋白j链试剂盒硫长春质碱;Catharanthine
: ivcas7.01200资源名称: 苏云金芽孢杆菌 质量规格：>98%,标准品免疫球蛋白G4试剂盒莲心碱;Liensinine
磷脂酶D(PLD)测试盒50管/48样动物双歧杆 对甲苯酰核糖核酸A1Elisa
巴氏醋杆罗旺亚种 1,1'-双(二-叔丁基膦基)二茂铁尿苷二磷酸葡萄糖酸转移Elisa
光帽磷伞 3-硝基苄高尔基体膜蛋白Elisa
芽胞杆 3-乙氧基烯酸复合型表皮生长因子样结构域蛋白8Elisa
尖镰孢黄瓜专化型（黄瓜枯萎病） 2-(1-萘基)-5-苯基噁唑低密度脂蛋白受体相关蛋白2Elisa
多布克鲁维酵母 3,4-二氨基血红蛋白β亚基Elisa
白僵 3-甲酯跨膜受体蛋白Notch-2Elisa
樟疫霉 4-苄氧基-3-苯酸Ⅴ型胶原α2Elisa
醋化醋杆 3-溴甲酯LINGO1Elisa
酿酒酵母 3,5-二溴O-连锁-N-乙酰葡糖基转移Elisa
柠檬两面神 2--4-氟-5-DNA甲基转移3LElisa
热线链霉 4-基-3-氟苯酸口腔癌致病基因BPIFB2Elisa
胶孢 3-(丁基苯氨基)锚蛋白Elisa
小孢拟棘壳孢 5,7-二氟-1-印酮脱氢3家族成员A1Elisa
沉积物假海源杆 环烷酸钙肾小管间质肾炎抗原Elisa
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