化工仪器网
详细介绍
商品属性：
产品名称 | |
检测方法 | 微量法 |
产品规格 | 100管/96样 |
产品货号 | AS6321238 |
商品介绍：
测定意义： SDH（EC 1.1.1.14）催化山梨醇脱氢生成果糖，是调控生物体内山梨醇含量的关健酶之一。 测定原理： SDH催化山梨醇脱氢生成果糖，同时还原NAD+生成NADH，测定340nm吸光度增加速率可以计算SDH活性。 需自备的仪器和用品： 紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。 |
试剂的组成和配制：
酸性提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存；碱性提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存；试剂一：液体10 mL×1瓶，4℃保存；试剂二：液体3 mL×1瓶，4℃保存；试剂三：粉剂×1瓶，-20 ℃保存，用时加入3mL蒸馏水，混匀，用不完的试剂4℃保存一周；试剂四：粉剂×1瓶，4 ℃保存，用时加入3mL蒸馏水，混匀，用不完的试剂4℃保存一周；试剂五：液体3.6mL×1瓶，4 ℃保存；试剂六：液体30mL×1瓶，4 ℃保存；试剂七：液体50mL×1瓶，4 ℃保存。
自备仪器和用品：
可见分光光度计、台式离心机、移液器、1 ml玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
NAD+和NADH的提取：
1、血清（浆）中NAD+和NADH的提取 NAD+的提取：按照血清（浆）体积（ml）：酸性提取液体积（ml）为1：5~10的比例（建 议取约0.1ml血清（浆），加入1ml酸性提取液），95℃水浴5min（盖紧，以防止水分散失）； 冰浴中冷却后，10000g 4 ℃离心10min；取500μl上清液，加入500μl碱性提取液使之中 和，混匀，10000g 4 ℃离心10min，取上清，置冰上待测。 NADH的提取：按照血清（浆）体积（ml）：碱性提取液体积（ml）为1：5~10的比例（建 议取约0.1ml血清（浆），加入1ml碱性提取液），95℃水浴5min（盖紧，以防止水分散失）； 冰浴中冷却后，10000g 4 ℃离心10min；取500μl上清液，加入500μl酸性提取液使之中 和，混匀，10000g 4 ℃离心10min，取上清，置冰上待测。 | 2、组织中NAD+和NADH的提取： NAD+的提取：按照组织质量（g）：酸性提取液体积（ml）为1：5~10的比例（建议取约0.1g 组织，加入1ml酸性提取液），冰浴研磨，95℃水浴5min（盖紧，以防止水分散失）；冰浴 中冷却后，10000g 4 ℃离心10min；取500μl上清液，加入500μl碱性提取液使之中和，混匀，10000g 4 ℃离心10min，取上清，置冰上待测。 NADH的提取：按照组织质量（g）：碱性提取液体积（ml）为1：5~10的比例（建议取约0.1g 组织，加入1ml碱性提取液），冰浴研磨，95℃水浴5min（盖紧，以防止水分散失）；冰浴 中冷却后，10000g 4 ℃离心10min；取500μl上清液，加入500μl酸性提取液使之中和， 混匀，10000g 4 ℃离心10min，取上清，置冰上待测。 | 3、细胞或细菌中NAD+和NADH的提取： NAD+的提取：先收集细胞或细菌到离心管内，弃上清，按照细菌或细胞数量（104个）：酸性 提取液体积（ml）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1ml酸性提取液）， 超声波破碎（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次），95℃水浴5min （盖紧，以防止水分散失）；冰浴中冷却后，10000g 4 ℃离心10min；取500μl上清液，加 入500μl碱性提取液使之中和，混匀，10000g 4 ℃离心10min，取上清，置冰上待测。 NADH的提取：先收集细胞或细菌到离心管内，弃上清，按照细菌或细胞数量（104个）：碱 性提取液体积（ml）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1ml碱性提取液）， 超声波破碎（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次），95℃水浴5min （盖紧，以防止水分散失）；冰浴中冷却后，10000g 4 ℃离心10min；取500μl上清液，加 入500μl酸性提取液使之中和，混匀，10000g 4 ℃离心10min，取上清，置冰上待测。 |
ADH测定操作：
1. 分光光度计预热30 min，调节波长到340 nm，蒸馏水调零。
2. 试剂二在25℃水浴中保温30 min。
3. 空白管：在1mL石英比色皿中依次加入100μL蒸馏水、800μL试剂二和100μL试剂四，迅速混匀后于340nm测定吸光值变化，分别记录15s和75s时吸光值，分别记为A1和A2。△A空白管=A1-A2。。
4. 测定管：在1mL石英比色皿中依次加入100μL上清液、800μL试剂二和100μL试剂四，迅速混匀后于340nm测定吸光值变化，分别记录15s和75s时吸光值，分别记为A3和A4。△A测定管=A3-A4。
注意：空白管只需测定一次。
注意事项：
①加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
②使用干净的塑料容器配置洗涤液。
③按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
④底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。
⑤洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
⑥使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器 。
⑦实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
⑧试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
⑨不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。
姜黄（标准品）英文名： Cefaclor蚓激抗体包装5g
姜（标准品）英文名： Cefradine瘦抗体包装1g
降二氢辣椒碱英文名： Cefradine瘦受体抗体包装25g
降香（标准品）英文名： Ceftizoxime acid瘦受体抗体（长）包装5g
胶苍术甙，羧基苍术苷二盐(标准品)英文名： Ceftizoxime acid晚期包膜蛋白1抗体包装1g
焦地黄乙甙A1英文名： OXYPEUCEDANINHYDRATE富含亮样性核蛋白抗体包装25g
焦地黄乙甙B1英文名： AG 490(Tyrphostin B42)晚期包膜蛋白2B抗体包装5g
焦性没食子（标准品）英文名： Ganoderic acid F脂肪家庭成员K抗体包装100ml
绞股蓝（标准品）英文名： Ursodeoxycholic acid白血病相关蛋白18/癌蛋白18抗体包装500ml
绞股蓝皂苷(标准品)英文名： Ursodeoxycholic acid无脑回的致病基因LIS1抗体包装100g
绞股蓝皂苷A(标准品)英文名： Cefetamet pivoxil hydrochloride溶体相关膜蛋白3抗体包装25g
绞股蓝皂苷XLIX（标准品）英文名： Cefetamet pivoxil hydrochloride亮脑啡肽抗体包装1g
节裂角茴香（标准品）英文名： L-Biopterin自噬微管相关蛋白轻链3抗体包装5g
结石草（标准品）英文名： Wortmannin指髌骨综合征相关蛋白NPS1抗体包装250mg
介芬英文名： Neostigmine bromide自噬微管相关蛋白轻链β3抗体包装100g
枯草芽孢杆菌Bacillus│subtilis 质量规格：HPLC≥99.0%,标准品抗染色质解旋DNA结合蛋白4试剂盒风信子;2-(1-Ethoxyetho
致病性大肠埃希菌Escherichia│coli 质量规格：纯度> 99%抗染色体抗体试剂盒覆盆子;4-(4-Hydroxyphe
产黄青霉Penicillium│chrysogenum 质量规格：>98.5%,BR抗缩试剂盒番泻苷D;Sennoside D
山梨醇脱氢酶（SH）测试盒100管/96样恶臭假单胞 2-氟半胱蛋白抑制剂;胱抑CElisa
桃色枝顶孢 4-氟天冬蛋白抑制剂Elisa
橘色硬皮马勃 3-氟S1核酸Elisa
Escherichia 吲唑-3-羧酸刀豆AElisa
马克斯克鲁维酵母 2--4,6-二甲基嘧啶雌二Elisa
砖红镰孢 2-氟苯甲基溴孕酮Elisa
猪链球 2,4,5-三氟环腺苷二磷酸核糖Elisa
花盖红菇 5-氟脱镁叶绿a氧化Elisa
胶质肉座 (甲氧基)二苯基磷氧谷转氨Elisa
根瘤 甲硫基乙酸乙酯葡聚糖Elisa
阪崎肠杆 2-氟羧甲基赖Elisa
细链格孢 2-环己基乙多聚半乳糖酸Elisa
木生假丝酵母 2,3-二氢-1,4-苯并二烷-5-羧酸二烯氧化物环化Elisa
酿酒酵母 3-(4-吗啉)-1-l2一氧一植物二烯酸还原Elisa
Glaciihabitans 2-氟-6-髓过氧化物Elisa
化工仪器网