PM脉冲缓冲液

PM脉冲缓冲液公司正在销售的产品：兔磷脂酶A1(PLA1)试剂盒Anti-CCKBR Antibody广谱角蛋白PCK抗体
兔鸟苷酸交换因子(GEF)试剂盒 Anti-CCKBR Antibody果胶酶抗体
兔脑多巴神经营养因子(CDNF)试剂盒 Anti-CCKBR AntibodyPRPF4蛋白抗体
兔神经型一氧化氮合酶(NOS1/nNOS)试剂盒Anti-CCKBR Antibody青霉素

产品分类：细胞培养

储存条件  4℃,6个月

用途  电诱导细胞融合试剂，用于清洗B淋巴细胞和骨髓瘤细胞，以及作为加交流、直流电场时的介质。

注意事项  无菌溶液。由蔗糖、醋酸镁、醋酸钙等组成。

公司产品仅用于科研具有质量可靠、效果稳定、灵敏度高、操作简单、易保存等特点，咨询并订购！

 

配制与标定的实验原理：

1、用EDTA二钠盐配制EDTA标准溶液的原因；

EDTA是四元酸，是一种白色晶体粉末，常用H4Y表示，溶解度很小，室温溶解度为0.02g/100g H2O。

2、标定EDTA标准溶液的工作基准试剂，基准试剂的预处理：称量前一般应先用稀盐酸洗去氧化层，然后用水洗净，烘干。

配制步骤：

1、取适量锌片放在100mL烧杯中，用0.1mol·L-1 HCl溶液（自配）清洗1min，再用自来水、纯水洗净，烘干、冷却。

2、用直接称量法在干燥小烧杯中准确称取0.15～0.2g Zn，盖好小表面皿。

3、用滴管从烧杯口加入5mL 1:1 盐酸，待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁，小心地将溶液转移至250mL容量瓶中，用纯水稀释至标线，摇匀。

 

 

实验方法与判定：

1.对照品溶液的稳定性

2.对照品溶液的配制：精密量取脑对照品适量，加无水乙醇制成每1ml含脑1mg的溶液，作为对照品溶液。

3.色谱条件：以交联键合聚乙二醇为固定相的毛细管柱；柱温120℃；进样口温度250℃；检测器温度250℃；分流进样，分流比10:1。理论塔板数按脑计算应不低于10000。

4.实验方法：配制的对照品溶液，一份置冷处保存，一份置室温中保存，在第1、3、7、10、15天重新配制一份对照品溶液，三种储备液同时稀释制成每1ml中约含50ug的溶液。照气相色谱法，并依据新对照品的峰面积计算原对照品溶液的含量。记录下来，保证原对照品溶液含量在考察期相对平均偏差不超过2.0%，验证对照品溶液在使用期内稳定可靠。

使用方法：

1.  常用筛选浓度

注意：用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型，培养基，生长条件和细胞代谢率而变化，推荐使用浓度为50-1000μg/mL。对于第一次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线（kill curve），即剂量反应性曲线，来确定最佳筛选浓度。

一般而言，哺乳动物细胞50-500μg/mL；细菌/植物细胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。

2. 杀灭曲线的建立

注意：为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株，需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素浓度，可通过建立杀灭曲线（剂量反应曲线）来实现，至少选择5个浓度。

1）  第一天：未转化的细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上，37℃，CO2培养过夜；注：对于需要更高密度来检测活力的细胞，可增加接种量。

2）  根据细胞类型，设定合适范围内的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例，可设定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去离子水或者PBS buffer按照1:10的比例将母液稀释到5 mg/ml，然后按照下表稀释到相应浓度的工作液。

3）  第二天：替换旧的培养基，换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基。每个浓度做三个平行孔。

4）  接下来每3-4天更换新的含药物培养基。

5）  按照固定的周期（如每2天）进行活细胞计数来确定阻止未转染细胞生长的恰当浓度。选择在理想的天数（通常是7-10天）内能够杀死绝大多数细胞的浓度为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。

3.   稳定转染细胞的筛选

1）  转染48h后，用含有适当浓度的潮霉素B筛选培养基来传代细胞（直接传代或者稀释后传代）。

注意：细胞处于活跃分裂状态时抗生素的杀伤。则当细胞过于稠密，其效率会降低。为了得到较好的筛选效果，最好将细胞稀释至丰度不超过25%

2）  每隔3-4天更换含有药物的筛选培养液。

3）  筛选7天后观察并评估细胞克隆（集落）的形成情况。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间，这取决于宿主细胞类型，转染，以及筛选效果。

4）   挑取并转移5-10个抗性克隆于35mm细胞培养板，继续用含药物的筛选培养液维持培养7天。

5）   之后更换正常培养基培养即可。

25羟基维生D3(25(OH)D3/25 HVD3)25(OH)D3/25 HVD3 ELISA KitBcl2样凋亡蛋白14抗体包装5g

25羟基维生D3(25 HVD3)25 HVD3 ELISA KitBcl2蛋白修饰因子抗体包装1g

25羟基胆固(25-OHC)25-OHC ELISA Kit骨形态发生蛋白11抗体包装5g

20S蛋白体(20SP)20SP ELISA KitBCL2样15促凋亡蛋白抗体包装25g

17-类固(17-KS)17-KS ELISA Kit骨碱性磷抗体包装100g

17羟孕(17-OHP)17-OHP ELISA Kit磷化T淋巴连接蛋白抗体包装25g

17羟皮质类固(17-OHCS)17-OHCS ELISA Kit磷化T淋巴连接蛋白抗体包装500g

17-α睾(17-αMT)17-αMT ELISA Kit脑纳前体抗体包装10MG

16α羟基雌1(16-α OHE-1)16-α OHE-1 ELISA Kit脑纳前体抗体包装100mL

15脂加氧(15-LO/LOX)15-LO/LOX ELISA Kit骨髓基质干抗原1抗体包装25mL

12羟二十烷四烯(12-HETE)12-HETE ELISA Kit磷化蛋白酪激ATK抗体包装1g

1,4,5-三磷肌(IP3)IP3 ELISA Kit磷化蛋白酪激ATK抗体包装5g

1,3-βD葡葡糖苷(1,3-βD-Glu)1,3-βD-Glu ELISA Kit磷化相关死亡促进因子抗体包装100ml

1,25二羟基维生D3(1,25 DHVD3)1,25 DHVD3 ELISA Kit磷化死亡调解子抗体包装1g

组织蛋白B(CTSB)CTSB ELISA Kit磷化死亡调解子抗体包装250mg

甘油酯激线粒体抗体基质金属蛋白3(MMP3)PTZ-343 is a phenothiazine derivative with chemical name: sodium 3-(10H-phenothi
PM脉冲缓冲液Phospho-EGFR(Tyr998) /FITC  荧光标记兔抗人、大、小鼠化表皮生长因子受体IgG氢化锂 95%

EGF(mouse)/FITC  荧光标记表皮生长因子(小鼠)IgG氢化锂 2.0M四溶液

HB-EGF/DTSF/FITC  荧光标记肝结合性表皮生长因子IgG吡啶-2- 98%

EGF/FITC  荧光标记表皮生长因子(大鼠)IgG2,4,6-吡啶 99%

EP3/FITC  荧光标记前列腺E受体3IgG丁酰酯 97%

E.coli O6 (Escherichia coli O6)/HRP  辣根过氧化物标记抗大肠埃希杆菌O6IgG巴豆酯 98%

E.coli DH-5 Alpha/FITC  荧光标记抗DH5α大肠杆菌菌体蛋白IgG糖化  液化型，万u/ml

E.coli DH-5 Alpha /HRP  辣根过氧化物标记抗DH5α大肠杆菌菌体蛋白IgGα-淀粉 BR