详细介绍
产品分类:免疫组化
储存条件:—20℃,12个月
用途:抗原修复缓冲液
注意事项:主要由胃蛋白酶溶解于稀酸溶液中。
公司产品仅用于科研具有质量可靠、效果稳定、灵敏度高、操作简单、易保存等特点,咨询并订购!
产品名称 | 规格 | 货号 |
胃蛋白酶抗原修复液 | 100ml | FS-R7272 |
配制与标定的实验原理:
1、用EDTA二钠盐配制EDTA标准溶液的原因;
EDTA是四元酸,是一种白色晶体粉末,常用H4Y表示,溶解度很小,室温溶解度为0.02g/100g H2O。
2、标定EDTA标准溶液的工作基准试剂,基准试剂的预处理:称量前一般应先用稀盐酸洗去氧化层,然后用水洗净,烘干。
配制步骤:
1、取适量锌片放在100mL烧杯中,用0.1mol·L-1 HCl溶液(自配)清洗1min,再用自来水、纯水洗净,烘干、冷却。
2、用直接称量法在干燥小烧杯中准确称取0.15~0.2g Zn,盖好小表面皿。
3、用滴管从烧杯口加入5mL 1:1 盐酸,待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁,小心地将溶液转移至250mL容量瓶中,用纯水稀释至标线,摇匀。
实验方法与判定:
1.对照品溶液的稳定性
2.对照品溶液的配制:精密量取脑对照品适量,加无水乙醇制成每1ml含脑1mg的溶液,作为对照品溶液。
3.色谱条件:以交联键合聚乙二醇为固定相的毛细管柱;柱温120℃;进样口温度250℃;检测器温度250℃;分流进样,分流比10:1。理论塔板数按脑计算应不低于10000。
4.实验方法:配制的对照品溶液,一份置冷处保存,一份置室温中保存,在第1、3、7、10、15天重新配制一份对照品溶液,三种储备液同时稀释制成每1ml中约含50ug的溶液。照气相色谱法,并依据新对照品的峰面积计算原对照品溶液的含量。记录下来,保证原对照品溶液含量在考察期相对平均偏差不超过2.0%,验证对照品溶液在使用期内稳定可靠。
使用方法:
1. 常用筛选浓度
注意:用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型,培养基,生长条件和细胞代谢率而变化,推荐使用浓度为50-1000μg/mL。对于第一次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线(kill curve),即剂量反应性曲线,来确定最佳筛选浓度。
一般而言,哺乳动物细胞50-500μg/mL;细菌/植物细胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。
2. 杀灭曲线的建立
注意:为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株,需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素浓度,可通过建立杀灭曲线(剂量反应曲线)来实现,至少选择5个浓度。
1) 第一天:未转化的细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上,37℃,CO2培养过夜;注:对于需要更高密度来检测活力的细胞,可增加接种量。
2) 根据细胞类型,设定合适范围内的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例,可设定50,100,250,500,750,1000μg/mL。先用去离子水或者PBS buffer按照1:10的比例将母液稀释到5 mg/ml,然后按照下表稀释到相应浓度的工作液。
3) 第二天:替换旧的培养基,换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基。每个浓度做三个平行孔。
4) 接下来每3-4天更换新的含药物培养基。
5) 按照固定的周期(如每2天)进行活细胞计数来确定阻止未转染细胞生长的恰当浓度。选择在理想的天数(通常是7-10天)内能够杀死绝大多数细胞的浓度为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。
3. 稳定转染细胞的筛选
1) 转染48h后,用含有适当浓度的潮霉素B筛选培养基来传代细胞(直接传代或者稀释后传代)。
注意:细胞处于活跃分裂状态时抗生素的杀伤。则当细胞过于稠密,其效率会降低。为了得到较好的筛选效果,最好将细胞稀释至丰度不超过25%
2) 每隔3-4天更换含有药物的筛选培养液。
3) 筛选7天后观察并评估细胞克隆(集落)的形成情况。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间,这取决于宿主细胞类型,转染,以及筛选效果。
4) 挑取并转移5-10个抗性克隆于35mm细胞培养板,继续用含药物的筛选培养液维持培养7天。
5) 之后更换正常培养基培养即可。
壳菌同源盒基因HOXA3蛋白抗体Human STK32B ELISA Kit大鼠肝X受体β(LXRβ)免疫试剂盒
谷棒杆菌同源盒基因HOXA4蛋白抗体Human STK33 ELISA Kit大鼠肝X受体α(LXRα)免疫试剂盒
活泼微球菌同源盒基因HOXA6蛋白抗体Human STK33 ELISA Kit大鼠甘油三酯(TG)免疫试剂盒
翘鳞香菇同源盒基因HOXA7蛋白抗体Human STK32B ELISA Kit大鼠甘油-3-磷脱氢(GAPDH)免疫试剂盒
链格孢羟基类固(17β)脱氢4/17β-HSD4抗体Human STK32C ELISA Kit大鼠甘露糖寡糖1,2-α-甘露糖苷IA(MAN1A1)免疫试剂盒
白腐菌血红蛋白ζ链/Hemoglobin ζ 抗体Human STEAP3 ELISA Kit大鼠甘胆(CG)免疫试剂盒
粘丝膜菌血红结合蛋白1抗体Human STK36 ELISA Kit大鼠/甘(GAL)免疫试剂盒
霍氏格里蒙特氏菌血红蛋白α抗体Human STIM1 ELISA Kit大鼠甘免疫试剂盒
澳型核果褐腐病菌结合球蛋白β抗体Human STIM2 ELISA Kit大鼠干因子受体(SCFR)免疫试剂盒
好食脉孢菌海马丰富基因转录蛋白1抗体Human STARD3NL ELISA Kit大鼠干因子/肥大生长因子(SCF/MGF)免疫试剂盒
动物双歧杆菌组蛋白H2AZ抗体Human STEAP4(STEAP family member 4) ELISA Kit大鼠干扰诱导蛋白11(IP-11/CXCL11)免疫试剂盒
巴氏醋杆菌罗旺亚种热休克因子2结合蛋白抗体Human STARD5 ELISA Kit大鼠干扰诱导蛋白10(IP-10/CXCL10)免疫试剂盒
光帽磷伞HEATR2蛋白抗体Human STIP1 ELISA Kit大鼠钙卫蛋白(CALP)免疫试剂盒
芽胞杆菌铁硫簇整合同源物2蛋白抗体Human STEAP3 ELISA Kit大鼠钙网蛋白(CRT)免疫试剂盒
尖镰孢黄瓜专化型(黄瓜枯萎病菌)麻疹病血凝抗体Human STEAP2 ELISA Kit大鼠钙腔蛋白(CALU)免疫试剂盒
多布克鲁维酵母同源盒蛋白HOXC5抗体Human STIM1 ELISA Kit大鼠钙结合蛋白(CR)免疫试剂盒
: Blackburn资源名称: 链球菌 质量规格:Standard for GC ,>98.5%(GC)没食子儿茶
酿酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 质量规格:standard for GC, ≥99.5% (GC)芒柄花苷
假交替单胞菌Pseudoalteromonas│tetraodonis 质量规格:standard for GC,>99.5%(GC)豆甾
胃蛋白酶抗原修复液SP ELISA Kit 大鼠P物质规格: 48T
AFU ELISA Kit 大鼠αL岩藻糖mei规格: 48T
TPO ELISA Kit 大鼠jia状腺过氧化物mei规格: 48T
PI ELISA Kit 大鼠胰岛su规格: 48T
大鼠抗IgE受体ELISA Kit 大鼠抗IgE受体规格: 48T