碱性磷酸酶染色液

碱性磷酸酶染色液公司正在销售的产品：豚鼠激活素A(ACVA)试剂盒Anti-PPARA Antibody磷酸化14-3-3 α/β/ζ抗体
豚鼠靶向核糖核酸酶(TR)试剂盒Anti-PPARG Antibody丝棕榈酰转移酶1抗体
豚鼠神经降压素(NT)试剂盒 Anti-PPARG Antibody脂肪酸转运蛋白5抗体
豚鼠脑源性神经营养因子(BDNF) 试剂盒Anti-PPARGC1A Anti

公司产品仅用于科研具有质量可靠、效果稳定、灵敏度高、操作简单、易保存等特点，咨询并订购！

产品分类：酶类染色

储存条件：4℃,避光,6个月

用途：ALP染色液，碱性磷酸酶染色,适用于石蜡切片

注意事项：属于金属沉淀法,碱性磷酸酶活性出呈棕黑色,可能出现假阳性,采用阴性对照。二甲苯应采用AR以上级别。

 

 

配制与标定的实验原理：

1、用EDTA二钠盐配制EDTA标准溶液的原因；

EDTA是四元酸，是一种白色晶体粉末，常用H4Y表示，溶解度很小，室温溶解度为0.02g/100g H2O。

2、标定EDTA标准溶液的工作基准试剂，基准试剂的预处理：称量前一般应先用稀盐酸洗去氧化层，然后用水洗净，烘干。

配制步骤：

1、取适量锌片放在100mL烧杯中，用0.1mol·L-1 HCl溶液（自配）清洗1min，再用自来水、纯水洗净，烘干、冷却。

2、用直接称量法在干燥小烧杯中准确称取0.15～0.2g Zn，盖好小表面皿。

3、用滴管从烧杯口加入5mL 1:1 盐酸，待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁，小心地将溶液转移至250mL容量瓶中，用纯水稀释至标线，摇匀。

 

 

实验方法与判定：

1.对照品溶液的稳定性

2.对照品溶液的配制：精密量取脑对照品适量，加无水乙醇制成每1ml含脑1mg的溶液，作为对照品溶液。

3.色谱条件：以交联键合聚乙二醇为固定相的毛细管柱；柱温120℃；进样口温度250℃；检测器温度250℃；分流进样，分流比10:1。理论塔板数按脑计算应不低于10000。

4.实验方法：配制的对照品溶液，一份置冷处保存，一份置室温中保存，在第1、3、7、10、15天重新配制一份对照品溶液，三种储备液同时稀释制成每1ml中约含50ug的溶液。照气相色谱法，并依据新对照品的峰面积计算原对照品溶液的含量。记录下来，保证原对照品溶液含量在考察期相对平均偏差不超过2.0%，验证对照品溶液在使用期内稳定可靠。

白土苓(短柱肖菝契)（标准品） DL-Mandelic acid磷化KB抑制蛋白激α/β抗体包装1g

白土苓(华南肖菝葜)（标准品） Ascorbic acid；vitamin C磷化KB抑制蛋白激α/β抗体包装5g

白薇（标准品） Ascorbic acid；vitamin C纤毛内转运同源蛋白46抗体包装100g

白鲜碱(标准品) Octadecanamine白介-10受体a抗体包装25g

白鲜皮（标准品） Sorbic acid白介-13受体a1抗体包装500g

白杨(标准品） Luliconazole免疫相关鸟苷三磷基因抗体包装1g

白杨-7-O-龙胆二糖苷 5-Nitro-1,10-phenanthroline白介-13受体a2抗体包装25g

白英（标准品） Rotundic acid嗜粒趋化蛋白CCL1抗体包装5g

白芷（标准品） Bromophenol blue sodium salt磷化胰岛样生长因子1受体抗体包装1g

百部(对叶百部)（标准品） Thymol blue sodium salt胰岛降解抗体包装5g

百部（直立百部）（标准品） Sodium tetraphenylboron白介12抗体包装100ml

百合（标准品） Sodium sulfosalicylate白介4抗体包装25g

百两金A（标准品） Nitroso R Salt胰岛样生长因子结合蛋白9抗体包装5g

百秋李(标准品) Rhodizonic acid sodium salt干扰-gamma受体2抗体包装10mg

百蕊草（标准品） Indigo carmine白介27受体抗体包装100mg

弧菌Vibrio│sp. 质量规格：>97%,BR,无物类白抗原E试剂盒;2,6-Dihydroxypur

苏云金芽孢杆菌Bacillus│thuringiensis 质量规格：>98.5%,二合物类白抗原B27试剂盒湖贝;Hupehenine

扁桃拟茎点霉Phomopsis│amygdaliana Canonaco 质量规格：>98.5%,无,EP雷帕霉靶蛋白试剂盒黑芥子硫苷一;Sinigrin m
碱性磷酸酶染色液PIWIL1(piwi-like 1)  piwi 样1蛋白(抗原)规格： 0.5mg

PPAR Gamma (peroxisome proliferator-activated receptor-gamma)  过氧化mei活化增生受体γ（抗原）规格： 0.5mg

PP2Ac  蛋白磷suanmei4(抗原)规格： 0.5mg

Runx3  一种新发现的抑癌基因(抗原)规格： 0.5mg

RRAD (Ras-related associated with diabetes )  RRAD(多肽抗原)规格： 0.5mg

使用方法：

1.  常用筛选浓度

注意：用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型，培养基，生长条件和细胞代谢率而变化，推荐使用浓度为50-1000μg/mL。对于第一次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线（kill curve），即剂量反应性曲线，来确定最佳筛选浓度。

一般而言，哺乳动物细胞50-500μg/mL；细菌/植物细胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。

2. 杀灭曲线的建立

注意：为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株，需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素浓度，可通过建立杀灭曲线（剂量反应曲线）来实现，至少选择5个浓度。

1）  第一天：未转化的细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上，37℃，CO2培养过夜；注：对于需要更高密度来检测活力的细胞，可增加接种量。

2）  根据细胞类型，设定合适范围内的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例，可设定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去离子水或者PBS buffer按照1:10的比例将母液稀释到5 mg/ml，然后按照下表稀释到相应浓度的工作液。

3）  第二天：替换旧的培养基，换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基。每个浓度做三个平行孔。

4）  接下来每3-4天更换新的含药物培养基。

5）  按照固定的周期（如每2天）进行活细胞计数来确定阻止未转染细胞生长的恰当浓度。选择在理想的天数（通常是7-10天）内能够杀死绝大多数细胞的浓度为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。

3.   稳定转染细胞的筛选

1）  转染48h后，用含有适当浓度的潮霉素B筛选培养基来传代细胞（直接传代或者稀释后传代）。

注意：细胞处于活跃分裂状态时抗生素的杀伤。则当细胞过于稠密，其效率会降低。为了得到较好的筛选效果，最好将细胞稀释至丰度不超过25%

2）  每隔3-4天更换含有药物的筛选培养液。

3）  筛选7天后观察并评估细胞克隆（集落）的形成情况。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间，这取决于宿主细胞类型，转染，以及筛选效果。

4）   挑取并转移5-10个抗性克隆于35mm细胞培养板，继续用含药物的筛选培养液维持培养7天。

5）   之后更换正常培养基培养即可。