人沙眼衣原体抗体,CISA试剂盒使用说明书 

本试剂盒仅供研究使用公司实验室提供免费代测，7个工作日出结果，提供原始数据！

检测范围：每种的检测范围都有所不同,具体请查看说明书 

特异性：本试剂盒可同时检测天然或重组的指标，且与其他相关蛋白无交叉反应。 

有效期：6个月 

预期应用：ELISA法检测指标血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中含量或灵敏度。 

实验原理 

用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗指标抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗指标抗体、HRP标记的亲和素，经过*洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的指标呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。 

试剂盒组成及试剂配制 

1．试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。 

2．浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。 

3．中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。 

4．刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。 

需要而未提供的试剂和器材 

1. 标准规格酶标仪 

2. 高速离心机 

3. 电热恒温培养箱 

4. 干净的试管和Eppendof管 

5. 系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，用多通道移液器 

6. 蒸馏水，容量瓶等 

1. 酶联板（Assay plate ）：一块（96孔）。 

2. 标准品（Standard）：2瓶。 

3. 样品稀释液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。 

4. 生物素标记抗体稀释液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。 

5. 辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。 

6. 生物素标记抗体（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100） 

7. 辣根过氧化物酶标记亲和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100） 

8. 底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。 

9. 浓洗涤液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。 

10. 终止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。 

人沙眼衣原体抗体,CISA试剂盒本品用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗HVA抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗HVA抗体、HRP标记的亲和素，经过*洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的HVA呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

1. 酶标仪（建议参考仪器使用说明提前预热）

2. 微量加液器及吸头，EP管

3. 蒸馏水或去离子水，全新滤纸

1. 酶联板：一块（96孔）

2. 标准品，2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为100 ug/ml，做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释）后，分别稀释成100 ug/ml，50 ug/ml，25 ug/ml，12.5 ug/ml，6.25 ug/ml，3.12 ug/ml，1.56 ug/ml，样品稀释液直接作为标准浓度0 ug/ml，临用前15分钟内配制。如配制 50 ug/ml标准品：取0.5ml （不要少于0.5ml ） 100 ug/ml的上述标准品加入含有0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。

3. 样品稀释液：1×20ml。 

4. 检测稀释液A：1×10ml。

5. 检测稀释液B：1×10ml。

6. 检测溶液A：1×120μl（1:100）临用前以检测稀释液A 1:100稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（100μl/孔），实际配制时应多配制 0.1-0.2ml。如10μl检测溶液A加990μl检测稀释液A的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。

7. 检测溶液B：1×120μl/瓶（1:100）临用前以检测稀释液B 1:100稀释。稀释方法同检测溶液A。

8. 底物溶液：1×10ml/瓶。

9. 浓洗涤液：1×30ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。

10. 终止液：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。

11. 覆膜：5张

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人沙眼衣原体抗体,CISA试剂盒实验开始前，各试剂均应平衡至室温（试剂不能直接在37℃溶解）；试 剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量，如样品浓度过高时，应对样品进行稀释，以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。 

 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液 100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。

 弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加 检测溶液A工作液 100μl（在使用前一小时内配制），酶标板加上覆膜，37℃反应60分钟。

  温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板 3次，每次浸泡1-2分钟，大约400μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。

 每孔加检测溶液B工作液（同检测A工作液） 100μl，酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。

 温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。

 依序每孔加底物溶液90μl，酶标板加上覆膜37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。

 依序每孔加终止溶液50μl，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。

 用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。 在加终止液后立即进行检测。