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产品简介：
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目前, 利用微载体系统进行组 织工程细胞的大规模 培养受到医学 科研人员青 睐, 而且其研究发展非常迅速, 已成功利用该技术 进行了肝细胞、 成纤维细胞、 生肌细胞、 软骨细胞 [ 19 220] 等细胞系的大规模培养 。
4. 2 微载体培养的优点 微载体培养一定程度上克服了zui初的转瓶培 养的不足, 具有很多优点 :
( 1) 兼具单层培养 和悬浮培养的优势, 且是均相培养;
( 2) 细胞所处 环境均一;
( 3) 环境条件( 温度、 和 CO2 等) 容易 pH 测量与监控;
( 4) 具有较高的比表面积;
( 5) 培养操 作可系统化、 自动化, 降低了污染发生的机会。
4. 3 微载体培养步骤
1) 选择合适的微载体类型。为了获得zui高产 量的细胞, 先用少量几种微载体做细胞培养试验, 在一定时间内计算细胞贴壁率和细胞数, 并绘制 成曲线, 比较细胞容纳量、 微载体用量、 搅拌速度, 由此选出适当的微载体。
2) 浸泡水化及消毒。在玻璃容器内加入适量 的微载体, 按一定的比例加入无 Ca 2+ 、 2+ 的磷 Mg 酸缓冲液( PBS) 浸泡 3 h 以上, 轻轻搅动, 然后加 入 1/ 2 的新鲜 PBS 再洗 1 次。微载体的浓度一般 按 3 mg/ 100 mL 配 制, 搅 拌 速 度 控 制 在 50~ 70 r/ min。
3) 接种。根据细胞类型决定接种浓度。
4) 培养观察与细胞计数。在显微镜下直接观 察微载体上细胞的生长情况, 将微载体上的细胞 消化后计数并计算其浓度。
5) 消化。传代培养或收获细胞均需使细胞脱 离微载体, 通常采用酶消化法。
6) 分离细胞。对于回收率要求不高的细胞种类分组沉降简单易行, 而若要求高回收率, 则可用 过滤方法, 采用 100 Lm 孔径的尼龙网、 不锈钢网、 多孔玻璃滤器等将细胞与微载体分离开。
7) 传代培养。微载体上分离后的细胞可进一 步做微载体传代培养。
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