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李工年末分享细胞因子溶解方法
阅读:1201 发布时间:2014-12-4 李工年末分享细胞因子溶解方法
我们知道,PeproTech的所有细胞因子和蛋白均为冻干粉,这使得运输非常便捷,只要常温即可。而且,细胞因子和蛋白冻干粉非常稳定,在-20oC或-80oC条件下可保存数年。冻干粉在使用前需进行溶解,然后以液体形式加到培养体系或注射入动物体内。溶解步骤非常关键,因溶解不好会导致细胞因子或蛋白的失活,这也是很多用户在实际使用中经常遇到的问题。
技术部李工分享: PeproTech细胞因子中不含载体蛋白(Carrier Protein)或其他添加剂(如BSA、HAS或蔗糖等),并且通常以zui少量的盐来进行冻干处理,因此微量的细胞因子在冻干过程中会沉积于管内,形成很薄或不可见的蛋白层。所以我们建议在收到产品后,务必在开盖前先离心,使粘在管盖或管壁上的蛋白聚集于管底(此时能否见到白色沉淀均属正常现象)。
1.离心:高速离心 (10, 000 rpm) 20-30 秒,或低速离心 (2, 000 rpm) 5 分钟。
2.溶解(Reconstitution):PeproTech细胞因子用去离子水或其它缓冲液(根据说明书要求进行选择)溶解至说明书要求的浓度 (一般为 0.1-1.0 mg/mL,如10ug的产品,需用10uL-100uL的去离子水或缓冲液溶解)。溶解时不可振荡,避免因化学键的断裂造成蛋白失活,可加入适当的溶剂轻摇并静置一段时间,待细胞因子*溶解后使用。溶剂的选择:
1)要求用去离子水溶解的产品,务必不可用盐溶液,避免过高的盐浓度造成蛋白不可逆的析出;
2) 要求用盐溶液溶解的产品,请依照PeproTech细胞因子说明书上的浓度,同样也是为了避免过高的盐浓度。
经常有用户会问,为什么会有这么多种溶解方法?
答:我们知道,蛋白的溶解性与很多因素有关,其中比较重要的是pH值和离子强度。PeproTech的细胞因子或重组蛋白在出厂前均经严格测试,说明上所标明的溶解液是能够将该细胞因子或重组蛋白*溶解的液体。如果您所用的溶解液的pH值和离子强度与说明书中所标明的不符,很多时候会造成细胞因子或重组蛋白不能*溶解或者根本无法溶解,这样所配得的细胞因子或重组蛋白必然活性不够或丧失。