在酸性溶液和还原剂的作用下，使运铁蛋白中铁与蛋白分离，使血清中的高铁还原成亚铁，后者与双吡啶结合成粉红色的络合物，在一定范围内，铁离子的多少与色泽成正比。

二、试剂的组成与配制：

1、100mg/L铁标准贮备液：1ml 溶液一瓶，4℃保存3个月。

   2mg/L铁标准应用液的配制：取铁标准贮备液0.2ml加蒸馏水定溶至10ml, 4℃保存。

2、铁显色剂：2号甲粉剂一支，2号乙粉剂一支，二号丙液100ml×1瓶，4℃保存6个月。

用时将甲、乙二粉剂倒入丙液中，充分混匀，溶解，即为铁显色剂，4℃避光保存。

三、操作表:

混匀后，沸水浴5分钟，（空白及标准管可以不煮），冷却后离心，3500转/分，离心10分钟，取上清液1.0ml,0.5cm光径，波长520nm,双蒸水调零，测各管吸光度OD值。
四、计算与举例：

1、 计算公式：

血清铁（mg/L）=×标准浓度（2mg/L）

血清铁（umol/L）=×标准浓度（35.81umol/L）

*标准管铁含量为2000ug/L,铁原子量为55.847，所以标准管铁含量为35.81umol/L

2、举例：

   取血浆0.5ml按操作表进行血清（浆）铁测定，在520nm处，0.5cm光径，测定各管吸光度为：空白管0.000，标准管0.038，测定管0.037，则计算如下：

   血清铁（umol/L）=×标准液浓度=×35.81=34.87（umol/L）

五、注意点：

1、 玻璃器材需严格清洗，避免铁的污染，建议用一次性塑料试管。

2、 若上清浑浊，可再用另一试管再次离心后比色。