大鼠巨噬细胞来源的趋化因子试剂盒

大鼠巨噬细胞来源的趋化因子试剂盒 大鼠MDC  大鼠elisa试剂盒

产品名称：大鼠巨噬细胞来源的趋化因子试剂盒     

各种种属：人、大小鼠、豚鼠、兔子、猪、犬、牛、羊…
标本齐全：血清、血浆、细胞培养上清液、组织匀浆、组织液、关节液、胸腔溢液等…
检测方法：酶联免疫法/酶免法（ELISA）
产品用途：For laboratory use only,Not for drug or other uses.本公司可提供免费代测服务.

试剂：
（1）　包被缓冲液（PH9.60.05M碳酸盐缓冲液）:
NaHCO３ 1.59克
NaHCO３　2.93克
加蒸馏水至1000ml
（2）  洗涤缓冲液（PH7.4PBS）：0.15M 　　
KH2PO4 0.2克
Na2HPO４·12H2O　2.9克
NaCl　8.0克 　　KCl　0.2克
Tween-20　0.05％　0.5ml
加蒸馏水至1000ml
（3）　稀释液：
牛血清白蛋白（BSA） 0.1克
加洗涤缓冲液至100ml
或以羊血清、兔血清等血清与洗涤液配成5～10％使用。
（4）　终止液（2M　H２SO４）： 　　
蒸馏水178.3ml，逐滴加入浓硫酸（98％）21.7ml。 　　
（5）　底物缓冲液（PH5.0磷酸枣柠檬酸）:
0.2MNa２HPO４（28.4克／L）25.7ml
0.1M柠檬酸（19.2克／L）　24.3ml
加蒸馏水50ml。
（6）　TMB（四甲基联苯胺）使用液:
TMB（10mg／5ml无水乙醇）0.5ml
底物缓冲液（PH5.5）　10ml
0.75％H２O２　32μl
（7）　ABTS使用液:
ABTS　0.5mg 　　
底物缓冲液（PH5.5）　1ml
3％H２O２　2μl
（8）　抗原、抗体和酶标记抗体。
（9）　正常人血清和阳性对照血清。

注意事项：
1.　正式试验时，应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件，待检样品应作一式二份，以保证实验结果的准确性。有时本底较高，说明有非特异性反应，可采用羊血清、兔血清或BSA等封闭。 　　
2.　在ELISA中，进行各项实验条件的选择是很重要的，其中包括:
（1）　固相载体的选择：许多物质可作为固相载体，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体，在使用前均可进行筛选：用等量抗原包被，在同一实验条件下进行反应，观察其显色反应是否均一性，据此判明其吸附性能是否良好。
（2） 包被抗体（或抗原）的选择：将抗体（或抗原）吸附在固相载体表面时，要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0～9.6之间。吸附温度，时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃ 18～24小时。蛋白质包被的zui适浓度需进行滴定：即用不同的蛋白质浓度（0.1、1.0和10μg／ml等）进行包被后，在其它试验条件相同时，观察阳性标本的OD值。选择OD值zui大而蛋白量zui少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1～10μg／ml。
（3）　酶标记抗体工作浓度的选择：首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定（见酶标记抗体部份）。然后再固定其它条件或采取“方阵法”（包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度）在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。
（4）　酶的底物及供氢体的选择：对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应，而本身无色。有些供氢体（如OPD等）有潜在的致癌作用，应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体，如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后，应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间，以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制，尤其是H2O2在临用前加入 。
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