大鼠L选择素试剂盒

大鼠L选择素试剂盒  大鼠L-Selectin大鼠elisa试剂盒

产品名称：大鼠L选择素试剂盒     

各种种属：人、大小鼠、豚鼠、兔子、猪、犬、牛、羊…
标本齐全：血清、血浆、细胞培养上清液、组织匀浆、组织液、关节液、胸腔溢液等…
检测方法：酶联免疫法/酶免法（ELISA）
产品用途：For laboratory use only,Not for drug or other uses.本公司可提供免费代测服务.

试剂：
（1）　包被缓冲液（PH9.60.05M碳酸盐缓冲液）:
NaHCO３ 1.59克
NaHCO３　2.93克
加蒸馏水至1000ml
（2）  洗涤缓冲液（PH7.4PBS）：0.15M 　　
KH2PO4 0.2克
Na2HPO４·12H2O　2.9克
NaCl　8.0克 　　KCl　0.2克
Tween-20　0.05％　0.5ml
加蒸馏水至1000ml
（3）　稀释液：
牛血清白蛋白（BSA） 0.1克
加洗涤缓冲液至100ml
或以羊血清、兔血清等血清与洗涤液配成5～10％使用。
（4）　终止液（2M　H２SO４）： 　　
蒸馏水178.3ml，逐滴加入浓硫酸（98％）21.7ml。 　　
（5）　底物缓冲液（PH5.0磷酸枣柠檬酸）:
0.2MNa２HPO４（28.4克／L）25.7ml
0.1M柠檬酸（19.2克／L）　24.3ml
加蒸馏水50ml。
（6）　TMB（四甲基联苯胺）使用液:
TMB（10mg／5ml无水乙醇）0.5ml
底物缓冲液（PH5.5）　10ml
0.75％H２O２　32μl
（7）　ABTS使用液:
ABTS　0.5mg 　　
底物缓冲液（PH5.5）　1ml
3％H２O２　2μl
（8）　抗原、抗体和酶标记抗体。
（9）　正常人血清和阳性对照血清。

操作步骤：
用于检测未知抗体的间接法：
用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg／ml，每孔加0.1ml，4℃过夜。次日洗涤3次。
 　　↓ 　　
加一定稀释的待检样品（未知抗体）0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤。（同时做空白、阴性及阳性孔对照）
 　　↓ 　　
于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标第二抗体（抗抗体）0.1ml， 　　37℃孵育30-60分钟，洗涤,zui后一遍用DDW洗涤。
 　　↓
加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分钟。
     ↓
终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。
     ↓
结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测OD值：在ELISA检测仪上，于450nm（若以ABTS显色，则410nm）处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性    
操作步骤：
用于检测未知抗原的双抗体夹心法
1.　包被：用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg／ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃ 过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。（简称洗涤，下同）。
2.　加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃ 孵育1小时。然后洗涤。（同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔）。
3.　加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体（经滴定后的稀释度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小时，洗涤。
4.　加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分钟。
5.　终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。
6.　结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测OD值：在ELISA检测仪上，于450nm（若以ABTS显色，则410nm）处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性 。
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