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供货周期 | 现货 | 应用领域 | 医疗卫生,环保,食品,化工,生物产业 |
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氯丙嗪快速检测试剂盒
使用说明书
【测定原理】
本试剂盒采用间接竞争ELISA法检测尿样和组织等样本中的氯丙嗪,在微孔条上预包被偶联抗原,利用抗原与抗体的特异性免疫化学反应的原理来进行,样本中的氯丙嗪和微孔条上预包被偶联抗原竞争标记有辣根过氧化酶的抗氯丙嗪抗体,通过洗涤后,用TMB底物显色,样品中的氯丙嗪含量与样品的吸光度值呈反比,与标准曲线比较即可得出氯丙嗪含量。
【试剂盒技术指标】
规 格:96孔/盒
灵 敏 度: 1ppb
检测时间: 45min
样本检测下限:
尿 液………………………………… 3ppb
组 织………………………………… 2ppb
饲 料 ……………………………… 1ppb
交叉反应率:
氯丙嗪(Salbutamol )……………… 100%
样本回收率:
尿 样 ……………………… 85%±10%
组 织 ……………………… 85%±15%
饲 料 ……………………… 85%±15%
【试剂盒组成】
【 所用仪器、试剂】
具备的仪器:微孔酶标仪、氮气吹干装置、打印机、均质器 、振荡器、离心机、恒温箱、天平(感量0.01g)、刻度移液管
微量移液器:单道20µl-200µl、100µl-1000µl、多道 250µl
试 剂: 乙腈、甲醇、正己烷、无水硫酸钠
【实验前溶液配制】
配液1、将30ml浓缩洗涤液(20倍浓缩)用去离子水按照1:19稀释(1份浓缩洗涤液+19份去离子水),或按所需用量配制洗涤液。
配液2:1X样本复溶液
将2X浓缩复溶液用去离子水按照1:1稀释(1 份浓缩复溶液+1份去离子水)用于样本的复溶。
【样本前处理步骤】
样本处理前须知
处理任何样本时,都必须注意:
(1)实验中必须使用一次性吸头,在吸取不同的试剂时要更换吸头。
(2)实验前须检查各种实验器具是否干净,必要时可对实验器具进行清洁,以避免污染干扰实验结果。
(a)尿样本的处理方法
取50µl清亮尿样直接测定(如果尿样浑浊一定要过滤或离心10min,4000r/min,直至得到清亮尿样),暂不使用的样本应冷冻保存。
由于尿液阴性样本可能会产生背景干扰 (在某些情况下干扰数值在标准2到3之间),所以推荐标准3即0.3ppb作为尿液阳性结果的CUT OFF判断值。
样本稀释倍数:1
(b)组织样本(肌肉和肝脏)处理方法
称取均匀后的组织样本2±0.05g ,加入6ml乙腈溶液,充分振荡2min。4000r/min以上,15℃离心10min;
1、 取上清液4ml,在56℃条件下氮气或空气流吹至*干燥;
肉样本:
加入1ml 去样本的复溶混合振荡30s,取50µl用于分析。
肉样本稀释倍数:1
肝脏样本:
加入2ml正己烷振荡溶解,再加入1ml 样本的复溶混合振荡30s,4000r/min以上,15℃离心5min,去除上层;取50µl下层 与50µl样本的复溶混匀;取50µl用于分析。
肝样本稀释倍数:2
(c)饲料样品的处理方法
1、 称1.0±0.05g研碎的饲料样品,加入10ml甲醇,再加入5g无水硫酸钠,放振荡器上振荡2min;15℃ 4000r/min以上离心10min;
2、 吸出离心后的上清液2ml,于56℃氮气吹干,用1 ml 样本复溶溶解干燥的残留物,再加入1mL正己烷混合30s ;15℃ 4000r/min以上离心5min
3、 取50µl下层 与50µl去样本的复溶混匀;取50µl用于分析。
样本稀释倍数:10
【酶标免疫分析程序】
操作步骤:
1.将所需试剂从冷藏环境中取出,置室温(20-25℃)平衡30min以上,注意每种液体试剂使用前均须摇匀。
2.按板架及需要取出微孔条,将不用的微孔放入自封袋,保存于2-8℃。
3.编号:将样本和标准品对应微孔按序编号每个样本和标准品做2孔平行,并记录标准孔和样本孔所在的位置。
4.加标准品/样本50µl /孔,然后加酶标记物50μl/孔,再加入抗体工作液50µl/孔。轻轻振荡混匀,用盖板膜盖板,25℃环境反应30min。
5.取出用洗涤液按每孔250μl洗板4-5次,每次浸泡15-30秒,拍干(拍干后未被清除的气泡用干净的枪头刺破)。
6.显色:每孔加入底物液A液50µl再加B液50µl,轻轻振荡混匀,25℃环境避光显色15min。
7.测定:每孔加入终止液50µl,轻轻振荡混匀,设定酶标仪于450nm处(建议用双波长450/630nm检测在5min内读完数据),测定吸光度值(OD值)。
【结果判定】
结果判定有两种方法,粗略判定可用第1种方法,定量判定用第2种方法。注意样本吸光值与其所含氯丙嗪的含量成负相关.
1、粗略判定:
用样品的平均吸光度值与标准值比较即可得出样本所含氯丙嗪浓度范围(ng/ml)。假设样品1的吸光度值为0.313,样品2的吸光度值为1.032,标准液吸光度值分别是:0ppb为1.892;1ppb为1.501;3ppb为1.175; 9ppb为0.751;27ppb为0.421; 81ppb为0.198。则样品1的浓度范围是27ppb-81ppb;样品2的浓度范围是3ppb-9ppb。乘以其对应的稀释倍数即为样本中氯丙嗪实际浓度。
2、定量分析:
所获得的每个浓度标准溶液和样本吸光度值的平均值(B)除以*个标准(0标准)的吸光度值(B0)再乘以100%,即:
百分吸光度值(%)= | B | ×100% |
B0 |
B—标准溶液或样本溶液的平均吸光度值
B0—0ng/ml标准溶液的平均吸光度值
以标准品百分吸光率为纵坐标,以氯丙嗪标准品浓度(ng/ml)的半对数为横坐标,绘制标准曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中,从标准曲线上读出样本所对应的浓度,乘以其对应的稀释倍数即为样本中氯丙嗪实际浓度。
若利用试剂盒专业分析软件进行计算,更便于大量样品的准确、快速分析。
3、标准准曲线:
B/B0 (%)
1 3 9 27 81
氯丙嗪(ppb) [µg/kg]:氯丙嗪检测试剂盒的回归曲线
4、再现性:
%CV
0 1 3 9 27 81
氯丙嗪(ppb) [µg/kg]:氯丙嗪检测试剂盒的精密度
由多个不同的实验结果确定了精密度,图2显示出氯丙嗪检测试剂盒的精密度情况,获得的标准吸收值的变异系数(%CV)对相应氯丙嗪浓度作曲线,可以看到在全部范围内变异系数如此之低,可以得到很好的再现性。
【注意事项】
【储存】原包装应储存于2~8℃保鲜冷藏,切勿冷冻。
【有效期】有效期12个月;生产日期、有效期、批号见外包装。
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