徕卡生物显微镜关于组织块的体积

徕卡生物显微镜到目前为止，冰凉固定，冰冻超薄切片及冰冻干操是组织及细胞x线微区的常规方法。对该方法的细节做以下几点说明。

徕卡生物显微镜这两种细胞中电解质的含量及分布十分不同。圆形心肌细胞中Na‘甚高而K’极低，线枝体中的ca”浓度十分高（250mm01／k8drywe炒t）。经过与其它分析方法核对，证明圆形细胞高Na4低K’及线粒体内高ca2’是由于在细胞分离过程中细胞膜受损伤的结果。细肋及组织的冰凉固定方法往往是先采取狞冷固定（quench一frMM），然后放入液氮中保存。淬冷固定对于保存的效果十分重要。活细胞或新鲜组织中富含水分，当淬冷时往往是纫胞或组织与碎冷剂（特别是用液氮粹冷时）直接接触的部位先冷冻固定，因而形成。便妨碍了细胞的中心部位碎冷固定。因此在作x一线微区分析时，常常发现较大的细胞的中心部位有冰晶存在。为了防止这种情况发生，便使用熔点比液氮高但低干一806c的物质作碎冷剂。这类物质很多，但zui易获得，价格员低廉的是浓态丙烷（沸点一42．120c，熔点一187．10c，分子量44．1），冷却速度也zui快。但其缺点是易燃。具体操作如下，对固定单根肌纤维而言。

徕卡生物显微镜一个非常重要的问题是在取材和分离细胞过程表10一1大鼠胰腺外分泌部分经过冰凉置换和树脂包埋（Fs），冰冻干燥和树脂包埋（FD）后冰冻超簿团片后，冰冻干燥（蝇）后细跑各部位65元素成分含量（均值L标准差mMd儿e）（引自R叨su88）中必须十分仔细，绝不能损伤待观察分析的细胞。因为作x线微区分析不但步骤繁多，而且成本甚高，如果经过长时间及多步骡的处理后，所分析的细胞是受损伤的细胞或死细胞，得出错误的结论是非常遗憾的。如经过胶元酶处理分离出的心肌细胞有两种形态，一种是长杆状，排斥台盼蓝门种是圆形，月台盼蓝染色对着蓝色。后者是在细胞分离过程中受损伤的濒死细胞。

徕卡生物显微镜可将肌纤维放在一特制的架上，使该肌纤维收缩达到某时相需要固定时，立即启动喷咀，使液态丙烷向肌纤维喷射，使之淬冷固定。然后再将肌纤维连同架子取出投入液氮中。如果固定血细胞或分离的细胞，首先低速离心使细胞集中，将细胞转移到一个导热性能良好的银质小管中、将该小管放入液态丙烷中狞冷固定。Hall实验室固定大鼠胰腺时，先将两钢块用液氦（或液氮）预冷，用钳夹住两铜块将其放在胰腺前后，使姨腺淬冷固定。组织或细胞淬冷固定后转移到液氮中可长期保存。

徕卡生物显微镜除目前zui推崇的冰冻超薄切片法外，在这里再介绍一种科学家们用过的沉积技术。在进行分析前加入一种物质，使之与待分析的成份形成沉积物以固定它，然后分析该沉积物。例如，人们常用草酸盐与焦锑酸盐去沉积肌细胞中的ca2’。前者对胞浆中低浓度的ca”敏感性不够高；焦锑吱盐的敏感性高些，可与脑浆中游离ca2’形成电子致密的沉积物，但焦锑酸盐与钠、锰、钡、铁也形成沉积物，特异性较差。尽管如此．焦锑憨盐与EGTA联合应用的组化反应显示脑内cas‘效果是很好的。标本制备过程类似于普通透射电镜超薄切片标本的制备，不同之处在于则osod固定前闻3％焦锑酸钾（磷酸盐缓冲液，pH7．6）固定6小时，在染色的肌肉超薄切片上，在每个肌节的A带和2带的中线可见黑色沉淀物、再用未染色的切片做X射线微区分析。人女I也曾用二氨基联苯胺四盐酸（DAB）去沉淀含血红素的物质等等。这种组化的沉淀反应与x射线微区分桥联合应用在不具备冰冻超薄切片条件的实验室可考虑采用。根据待分析元素的峰高可做半定量。

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