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离心机提取乳酸脱氢酶及辅酶具体操作说明

时间:2012-8-24阅读:1974
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离心机,想必很多人一听到这个词就知道这不就是实验室常用设备其中之一嘛。是的,说起离心机,大家都会联想到很多。台式离心机可以应用于乳酸脱氢酶及辅酶的提取。乳酸脱氢酶,是一种不需氧脱氢酶,以辅酶I(NAD﹢)为辅酶,催化乳酸与丙酮酸的可逆的氧化还原反应。肌肉中含有大量的乳酸脱氢酶,在乳酸含量较高及氧气充足情况下,催化乳酸生成丙酮酸,体外实验中,为观察方便,在隔绝空气后以甲烯蓝作为受氢体,井用固定反应中生成的丙酮酸,而使乳酸全部转化为丙酮酸。今天我们对如何通过台式离心机提取乳酸脱氢酶及辅酶I进行介绍。

通过离心提取乳酸脱氢酶及辅酶用到的材料、试剂及设备有:(1)动物后腿肌肉(2)9g/LNaCl溶液(3)活性炭(4)10g/L乳酸锂溶液(5)5g/LKCN溶液;(6)乳钵(7)台式离心机等

具体操作方法:

1.辅酶I(NAD﹢)的制备:取动物后腿肌肉2g置沸水浴中煮沸4—5分钟(抑制酶的活力,防止将辅酶I破坏),取出冷却、剪碎,加入少许9g/LNaCl溶液及细沙用乳钵研磨成糊状,再加9g/LNaCl溶液8ml混匀,利用台式离心机进行离心沉淀,收集上清液,储冰箱备用。

2.乳酸脱氢酶酶蛋白的提取:取动物后腿肌肉2g置乳钵中,加入少许9g/LNaCl溶液及细砂,仔细研磨后再加9g/LNaCl溶液8ml混匀,用双层纱布过滤,滤液加活性炭0.5g振摇数分钟后放置半小时,并时常摇动,然后通过台式离心机离心分离,取上清液备用。

看了以上的操作方法,你还可以自己试验一下,或者上海旦鼎贸易有限公司。:  我们将专业为您选购适合实验的离心机。

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