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全自动外泌体荧光检测分析
美国NanoView公司所开发的全自动外泌体荧光检测分析是款无需纯化的、全自动的可对单个外泌体进行表征分析的全新设备。该设备能够提供外泌体表征信息，包括外泌体粒径大小、计数、分布、携带蛋白表达、生物标志物（CD9，CD81，CD63等）共定位等。操作简单，结果可靠。经推出，便引起了外泌体域科研工作者的广泛关注，短短两年时间已有50多个实验室采用该技术，发表重要文献近百篇。
基本原理是种基于异性免疫捕获技术，允许研究者直接分析定群体的外泌体或外囊泡。通过配套的试剂盒，客户次性能够分析多达9个不同的样本，大大节省了时间和经济成本。兼容各种生物样本，除了纯化的外泌体之外，对于血液、尿液、恶性肿瘤、腹水中的外泌体也可直接检测分析，大大拓展了研究范围。
应用方向及主要征
生物标记物共定位 可量化4种标记物的表达情况 |
计数分析 直接从样品中计算抗原阳性外泌体的数量，无需提纯 |
粒径分析 高精度统计外泌体的颗粒大小及分布 |
检测外泌体内容物 使用ExoView Cargo试剂盒可探测外泌体内部核酸的装载情况，分析装载率 |
荧光检测 具备3个荧光通道，能够探测单个蛋白的结合 |
线性工作流程 9个样品的全自动分析 |
无须纯化 无需担心纯化带来的误差，测量样品间的表征和表达信息的差异 |
多重样本分析 可使用6种表面标记物来筛选外泌体 |
ExoView™ Kit 配置清单:
ExoView™ Tetraspanin Kits | CD9 - 捕获抗体 CD63 - 捕获抗体 CD81 - 捕获抗体 Mouse IgG 阴性对照 CD9、CD63、CD81三色共标记荧光抗体。 |
ExoView™ Tetraspanin Plasma Kits | CD9 - 捕获抗体 CD63 - 捕获抗体 CD81 - 捕获抗体 CD41a - 捕获抗体 多达三种定制化捕获抗体 同种阴性对照 CD9、CD63、CD81三色共标记荧光抗体。 |
ExoView™ Tetraspanin Custom Kits | CD9 - 捕获抗体 CD63 - 捕获抗体 CD81 - 捕获抗体 多达三种定制化捕获抗体 同种阴性对照 CD9、CD63、CD81三色共标记荧光抗体。 |
ExoView™ Cargo Kits | 兼容所有ExoView Kit 标准 CD9, CD63和CD81 捕获抗体 Mouse IgG 阴性对照 ExoView Cargo 试剂 CD9、CD63、CD81三色共标记荧光抗体。 Sytenin荧光抗体 |
粒径分析
全自动外泌体荧光检测分析能够对>50 nm的外泌体进行全方面的表征，无论是粒径尺寸、粒径分布还是外泌体的亚型均可在次测试中得到。并且所用来测试的样本无需进行纯化，避免因纯化带来的样本偏差。
分析不同大小和不同尺度的外泌体亚群，在CD171过表达系统中，100 nm以上的外泌体仅表达了CD171。
量化外泌体亚群
通过抗体捕获的模式，外泌体荧光检测分析能够量化含有不同标记物的外泌体亚群，并对不同种群的外泌体进行异性计数和分析。整个过程无需纯化，并且线性范围可跨越3个数量。
TSPAN8阳性细胞外囊泡的稀释曲线。使用1:3比例的梯度稀释。用R2 = 0.9986计算与TSPAN8荧光数据的线性拟合。
检测外囊泡中的装载物
MISEV建议在表征外泌体和外囊泡时，应当同时测量表面和载体蛋白。使用ExoView芯片可穿透外泌体，探测膜内蛋白和载体。并且单次可定量3种表面、管腔蛋白。
检测细胞外泌体内的Syntenin。
WT细胞在未穿膜的条件下几乎观测不到Syntenin的信号。进行穿膜处理后可以观测到Syntenin信号，而KO之后信号消失
生物标志物共定位
外泌体荧光检测分析能够在单个外泌体样本上检测多达4种标记物，并同时提供外泌体的其它表征数据诸如计数、颗粒尺寸统计等。
无需纯化
外泌体荧光检测分析只测量含有靶标抗原的定细胞外泌体群体。仅需35ul的稀释样品，即可直接获得外泌体的表型、l粒径和计数信息。并且无需担心污染物对测试的影响。
无论纯化与否，Exoview均可进行分析
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2020年已发表文献
