中性、碱性土壤速效磷含量检测试剂盒说明书
微量法
货号：BC2965
规格：100T/96S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1. 试剂一：临用前加入5 mL蒸馏水，溶解后2-8℃保存一周；

2. 试剂二：临用前加入5 mL蒸馏水，溶解后2-8℃保存一周；

3. 标准品：10 μmol/mL标准磷储备液；

4. 工作液（定磷剂）的配制：按H₂O：试剂一：试剂二：试剂三=2:1:1:1的比例配制，配好的工作液应为浅黄色。若变色则试剂失效，若是蓝色则为磷污染，工作液应现配现用。

注意：配试剂最好用新的烧杯、玻璃棒和玻璃移液器，也可以用一次性塑料器皿，避免磷污染。
产品说明：
速效磷是土壤中可被植物吸收的磷组分，包括全部水溶性磷、部分吸附态磷、一部分微溶性的无机磷和易矿化的有机磷等，土壤中速效磷是限制植物生长主要因子之一。
用弱碱法提取碱溶性磷和吸附态磷，钼蓝与磷酸根生成660nm有特征吸收峰的物质，通过测定660nm光吸收，即可计算磷含量。
技术指标：
低检出限：0.018 μmol/mL
线性范围：0.03125-3 μmol/mL
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
实验中所需仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、天平、台式离心机、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、30-50目筛、漩涡震荡仪、研钵、EP管、蒸馏水。
操作步骤：具体操作步骤详见“产品资料"附件
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

新鲜土样风干，过30-50目筛，按照土壤质量（g）：提取液体积(mL)为1：10-20的比例（建议称取约0.05g土样，加入1mL提取液），振荡提取1h，10000g，25℃离心10min，取上清液待测。
二、测定步骤

1. 分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至660nm，蒸馏水调零。

2. 将10μmol/mL标准液用提取液稀释为3、2、1、0.5、0.25、0.125μmol/mL的标准溶液备用。

3. 标准溶液稀释表：

4. 样本测定：(在1.5mL离心管中或96孔板依次加入下列试剂)

注意事项：
1、工作液（定磷剂）应现配现用，正常颜色为浅黄色，如有变色或变蓝则均为失效。
2、此法具有微量、灵敏、快速的特点。所以对测定所用试管或EP管等试验器材均要求严格无磷。
3、显色结束后应立即检测。
4、如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。
5、用96孔板检测时，注意板孔中的液体有无气泡，如有气泡应排除气泡后再测定OD值。
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