土壤游离氨基酸（S-FAA）含量检测试剂盒说明书

微量法

货号：BC5095

规格：100T/96S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1、 试剂四：临用前取1支加1 mL蒸馏水，充分溶解，用不完的试剂-20℃分装保存2周；（1支粉剂溶解后可做100T，为了延长使用时间，此产品多给1支粉剂）

2、 标准品：10 mg半胱*酸。临用前加入4.13 mL蒸馏水，得到20 μmol/mL的半胱氨*标准溶液备用，用不完的试剂可以2-8℃保存4周。

产品说明：

作为土壤中一类重要的化合物，氨基酸占土壤中全氮的15%-60%，是土壤氮素循环和植物养分供给过程中重要的“库"和“源"，可通过矿化作用满足作物氮素营养的需求，也可以被植物直接吸收利用。另外，氨基酸也是土壤微生物重要的氮源，对于土壤微生物群落结构、数量和活性均有直接影响。因此，研究土壤中氨基酸含量变化规律，对研究土壤氮素循环，及其对植物生理生态变化的影响均有重要意义。

氨基酸的α-氨基可与水合茚三酮反应在570nm有特征吸收峰；通过测定570nm吸光度，来计算氨基酸含量。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

台式离心机、可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵、30-50目筛、无水乙醇、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、 样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

土样37℃/自然风干后过30-50目筛，称取约0.15g土样，加试剂一1mL，振荡2h，10000rpm离心10min，取上清液，待测。

二、测定步骤

1. 分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至570nm，蒸馏水调零。

2. 标准品稀释：取60μL 20μmol/mL 标准液加入140μL蒸馏水得6μmol/mL标准溶液进行实验。

3. 操作表：（在EP管中进行）

混匀后盖紧瓶盖（缠封口膜防止水分散失），置于沸水浴中保温15min，冷却后反复颠倒EP管数次，8000rpm离心5min后取上清，于570nm测定吸光值，分别记为A测定管、A标准管、A空白管，并计算ΔA测定管=A测定管-A空白管，ΔA标准管=A标准管-A空白管，显色后务必在30min内测完。标准管、空白管只需做1-2次。

三、S-FAA含量计算

S-FAA含量（μmol/g 土样）=（C标准品×V标准品×ΔA测定管÷ΔA标准管）÷（V样÷V样总×W）

= 6×ΔA测定管÷ΔA标准管÷W

C标准品：标准品浓度，6μmol/mL；V标准品：反应体系中加入标准品体积，0.04mL；W：样本质量，g；V样：反应体系中加入样本体积，0.04mL；V样总：样本总体积，1mL。

注意事项：

1、 试剂四均需临用前配制，且避光保存。

2、 脯*酸和羟脯*与茚三酮反应在570nm处无吸收峰，因此，570nm处测定结果不含这两种氨基酸的量。

3、 如果ΔA测定管大于1，建议将样本上清液用试剂一稀释后进行测定。

实验实例：

1、 取0.15g土样加入1mL试剂一进行样本处理，取上清后按照测定步骤操作，使用96孔板测得A测定管=0.304、A标准管=0.603、A空白管=0.064，计算ΔA测定管=A测定管-A空白管=0.304-0.064=0.240，ΔA标准管=A标准管-A空白管=0.603-0.064=0.539，按样本质量计算含量得：

S-FAA（μmol/g土样）=6×ΔA测定管÷ΔA标准管÷W=6×0.240÷0.539 ÷0.15=17.811 μmol/g 土样。

参考文献：

[1] Wang X, Cui X Y, Guo Y F A study on free amino acid in different forest types soil of cold-temperate forest region[J]. Journal of Nanjing Forestry University (Natural Science Edition), 2016, 59(04): 42-48.

[2] Wang B, Jiang Y Y, Jiao J G, et al. Effects of earthworm on constituent and amount of amino acid in soil[J]. Acta Ecologica Sinica, 2015,35(14):4816-4823.

[3] Zhang X J, Wang W Y, Li W Q, et al. Dynamics of soil dissolved organic nitrogen in alpine meadow[J]. Journal of Lanzhou University: Natural Sciences, 2016, 52(5):623-627.

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