糖化血清蛋白（GSP）含量检测试剂盒（NBT法）说明书

可见分光光度法

货号：BC4940

规格：50T/48S

产品内容：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

标准品：临用前加入0.8 mL试剂二，充分溶解，配制成10 mmol/L DMF标准液，2-8℃保存4周；再取40µL 10 mmol/L DMF标准液和60µL试剂二混合配制成成4 mmol/L标准溶液待测。

产品说明：

血清葡萄糖与白蛋白及其它血清蛋白分子N末端的氨基发生非酶促糖化反应，形成高分子酮胺结构，在碱性条件下与硝基四氯唑蓝反应，生成紫红色化合物甲臜。在530nm波长处比色，测定其OD值，与DMF标准比较，即可求得其含量。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、恒温培养箱、低温离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

血清（浆）：收集血清（浆）到离心管内，按照血清（浆）体积（mL）∶试剂一体积（mL）= 10∶1的比例（建议吸取0.5 mL血清（浆）于EP管中，加入0.05 mL试剂一），充分混匀，于37℃保温30 min。

二、测定步骤

1、 可见分光光度计预热30 min以上，调节波长至530 nm，蒸馏水调零。

2、 标准溶液：按照标准溶液体积（mL）：试剂一体积（mL）= 10∶1的比例（建议吸取0.5 mL 4 mmol/L标准溶液于EP管中，加入0.05 mL试剂一），充分混匀，于37℃保温30 min。

3、 按下表步骤加样：

注：空白管和标准空白管均只需做1-2次。

三、糖化血清蛋白含量计算

糖化血清蛋白含量（mmol/L）=C×ΔA测定÷ΔA标准×F= 4×ΔA测定÷ΔA标准×F

C：标准溶液浓度，4 mmol/L；F：稀释倍数。

注意事项：

1、显色完成后，应立即加入试剂四；建议一次性不要做太多样本，防止试剂四加入不及时导致测定结果受到影响。

2、如果测定吸光值A＞1.0或ΔA＞0.8，建议稀释样本后再测定，计算公式中乘以稀释倍数；如果测定吸光值较低或接近空白OD值，建议增加操作表中的样本量后再进行测定（空白管、标准管、标准空白管需要增加至相同体积量）。

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