尿酸酶活性检测试剂盒说明书

可见分光光度法

注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。

货号：BC4430

规格：50T/24S

产品内容：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制： 

1、 标准品：临用前加入898 µL蒸馏水得到1 mmol/mL的过氧*氢溶液，2-8℃保存4周。

2、 工作液A的配制：按照试剂二：试剂三：试剂四 = 0.85mL：2.55mL：1.7mL（共5.1mL，6S）的比例配制，用于样本测定管、空白管及标准管的检测。根据样本量现配现用，配后建议2小时内用完（2-8℃或者冰上保存）。

3、 工作液B的配制：按照试剂二：试剂三：试剂一 = 0.85mL：2.55mL：1.7mL（共5.1mL，6S）的比例配制，用于样本对照管的检测。根据样本量现配现用，配后建议2小时内用完（2-8℃或者冰上保存）。

产品说明：

尿酸酶，又名尿酸*化酶，是一种参与嘌呤降解途径的氧化酶，可以将尿酸分解为尿囊酸素进而排出体外。尿酸为嘌呤代谢的终末产物，积累过多将导致痛风、肾病、心血管疾病等多种疾病的发生。尿酸酶在尿酸相关疾病的临床检测以及治疗中有着重要意义。

尿酸酶催化尿酸分解为尿*素、CO₂和H₂O₂，H₂O₂氧化亚铁*中的Fe²⁺生成Fe³⁺，Fe³⁺进一步与4-氨基安*比林和酚反应生成红色醌类化合物，在505 nm处有特征吸收峰，通过测定505 nm处的吸光值来反映尿酸酶的活性。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、低温离心机、水浴锅/恒温培养箱、1 mL玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器/细胞超

声破碎仪、冰、EP管、蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

组织：按照组织质量（g）: 提取液体积（mL）为1 : 5~10的比例（建议称取约0.1 g组织，加入1 mL提取液）进行冰浴匀浆，然后10000 rpm，4℃，离心10 min，取上清置于冰上待测。

细菌或细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴个）: 提取液体积（mL）为500~1000 : 1的比例（建议500万个细菌或细胞加入1 mL提取液），冰浴超声波破碎细菌或细胞（功率200 W，超声3 s，间隔7 s，总时间5 min）；然后10000 rpm，4℃，离心10 min，取上清置于冰上待测。

二、测定步骤

1、 分光光度计预热30 min以上，调节波长至505 nm，蒸馏水调零。

2、 将1 mmol/mL 标准液用蒸馏水稀释为0.25 µmol/mL的标准溶液备用。标准溶液的稀释：取20μL 1mmol/mL过氧化氢标准液，加入1980μL蒸馏水，充分混匀，配制成10μmol/mL标准液，再取50μL 10μmol/mL过氧化氢标准液，加入1950μL蒸馏水，充分混匀，配制成0.25μmol/mL标准液使用，现用现配。（实验中每管需要150μL，为减小实验误差，故配制大体积）。

3、 操作表：(在1.5 mL离心管中)

三、尿酸酶活性计算

（1）按样本质量计算

酶活定义：在pH 8.8的条件下，每克样本每小时分解尿酸产生 1 μmol 的H₂O₂定义为一个酶活力单位。

尿酸酶酶活（U/g 质量）= ΔA测定÷（ΔA标准÷C标准）×V样本÷（W×V样本÷V提取）÷T

= 0.5×ΔA测定÷ΔA标准÷W

（2）按蛋白浓度计算

酶活定义：在pH 8.8的条件下，每毫克蛋白每小时分解尿酸产生 1 μmol 的H₂O₂定义为一个酶活力单位。

尿酸酶酶活（U/mg prot）= ΔA测定÷（ΔA标准÷C标准）×V样本÷（Cpr×V样本）÷T

= 0.5×ΔA测定÷ΔA标准÷Cpr

（3）按照细菌或细胞数量计算

酶活定义：在pH8.8的条件下，每10⁴个细菌或细胞每小时分解尿酸产生 1 μmol 的H₂O₂定义为一个酶活力单位。

尿酸酶酶活（U/10⁴ cell）= ΔA测定÷（ΔA标准÷C标准）×V样本÷（N×V样本÷V提取）÷T

=0.5×ΔA测定÷ΔA标准÷N

C标准：标准溶液浓度，0.25 µmol/mL；V样本：加入的样本体积，0.15 mL；V提取：提取液体积，1 mL；T：酶促反应时间：0.5 h；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g；N：细菌数量（以万计）。

注意事项：

1、 A大于1时，建议将样本用提取液稀释后再进行测定，并在计算时乘以相应的稀释倍数。

2、 工作液A与工作液B，需根据样本量现配现用，配后建议2小时内用完。工作液本身为淡黄色，随着时间的延长，会变为红色，如有变色，则视为失效，需重新配制。

实验实例：

1、 取0.1g小鼠肝脏进行样本处理，取上清稀释8倍后按测定步骤操作，测定计算ΔA测定=A测定管-A对照管=0.652-0.218=0.434，ΔA标准=A标准管-A空白管=0.614-0.017=0.597，按样本质量计算酶活得：尿酸酶酶活（U/g 质量）= 0.5×ΔA÷ΔA标准÷W×8（稀释倍数）=29.08 U/g 质量。

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