土壤脂肪酶（S-LPS）活性检测试剂盒说明书
可见分光光度法
货号: BC3980
规格: 50T/24S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1. 标准品：临用前加入1.97 mL甲苯，即100 μmol/mL油酸。用前注意解冻溶解。用不完的试剂可以2-8℃保存一个月。

2. 工作液的配制：将试剂三临用前加入20 mL蒸馏水于沸水浴中溶解，2-8℃保存两周。冷却至常温后加入5 mL试剂二混合，高速震荡2次，每次3min，间隔5min。可根据该比例现用现配。

产品说明：
脂肪酶（LPS）又称甘油酯水解酶，催化甘油三酯水解生成脂肪酸和甘油（或者甘油二酯和单酯）。该酶在土壤生物动力学中具有重要的作用。
LPS催化油酯水解成脂肪酸，利用铜皂法测定脂肪酸生成速率，即可计算LPS活性。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、台式离心机、震荡混匀器、恒温水浴锅/恒温培养箱、可调式移液枪、研钵、甲苯（不可快递）、冰和蒸馏水、30-50目筛。
操作步骤：具体操作步骤详见“产品资料"附件
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
新鲜土样自然风干，过30-50目筛。
二、测定步骤

1. 分光光度计预热30min以上，调节波长至710nm，甲苯调零。

2. 标准溶液的稀释：取50µL 100µmol/mL油酸标准溶液，加入950µL甲苯，充分混匀，配制成5µmol/mL标准溶液待测，现用现配。（实验中每管需要1mL。）

1. 操作表：取2mL EP管，加入下列试剂

取出离心管，小心吸取上层有机相1mL，加入另一1.5mL EP管中，按下表操作：

反复充分震荡混匀；室温4000rpm离心10min，小心吸取上层有机相溶液800μL，加入1mL玻璃比色皿，于710nm处测定吸光值。记为A对照管、A测定管、A标准管、A空白管，计算ΔA测定=A测定管-A对照管，ΔA标准=A标准管-A空白管。空白管和标准管只需做1-2次。

注意事项：
1、甲苯有毒，实验过程中需佩戴手套和口罩。
2、实验过程中须远离火源。
3、当吸光度大于0.8时，建议将样本稀释后测量（第二次加入甲苯的量增加）。
4、甲苯可溶解聚苯乙烯/聚丙烯材质。

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