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液相色谱仪测定氨基酸的含量

阅读:3091        发布时间:2012-09-12
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    郑州博科仪器设备有限公司

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1L--色氨酸含量的测定
  
  1.1实验仪器与试剂
  
  色氨酸样品,甲醇,STI501液相色谱仪梯度系统,UV501紫外检测器,7725I手动进样阀,N2000色谱工作站,0.03%KH2PO4溶液
  
  1.2HPLC色谱分析条件
  
  流动相为0.03%KH2PO4溶液(A)-甲醇(B),线性梯度淋洗,流速1.0mL/min,柱温35℃,检测波长276nm。
  
  流动相时间(t/min)
  
  5101520
  
  A(%)80908070
  
  B(%)20102030
  
  1.3标准溶液的配制
  
  精密称取色氨酸标准标准品50mg,置100ml容量瓶中,振摇,用流动相溶解到刻度,作为供试品溶液,另取色氨酸样品适量,同法操作。
  
  1.4标准直线的制作
  
  精密称取色氨酸标准样品适量,分别稀释制成每1ml中含色氨酸50.0、100.0、200.0、400.0、600.0、800.0、1000.0μg的溶液,注入液相色谱仪,以色氨酸峰面积A为纵坐标,浓度C为横坐标,制作回归标准直线。
  
  1.5发酵液中样品中色氨酸含量的测定
  
  取发酵液,稀释配制成约500μg/ml的溶液,摇匀,过滤,取25μl进样,在液相色谱仪下测量,记录峰值面积,作图。
  
  2L-精氨酸含量的测定
  
  2.1实验仪器与试剂
  
  L-精氨酸标准样品,乙腈,STI501液相色谱仪梯度系统,UV501紫外检测器,7725I手动进样阀,N2000色谱工作站,磷酸二氢铵。
  
  PH计,磷酸,
  
  2.2HPLC色谱分析条件
  
  流动相:以磷酸二氢铵溶液(称取磷酸二氢铵1.15g,加水800m溶解后,用磷酸调节pH值至2.0±0.1,加水稀释至1000ml)-乙腈为流动相,线性梯度淋洗;柱温为30℃检测波长为206nm;进样量:25μl。
  
  2.3标准直线的制作
  
  精密称取精氨酸标准标准品50mg,置100ml容量瓶中,振摇,用流动相溶解到刻度,作为供试品溶液,另取色氨酸样品适量,同法操作。精密称取精氨酸标准样品适量,分别稀释制成每1ml中含精氨酸50.0、100.0、200.0、400.0、600.0、800.0、1000.0μg的溶液,注入液相色谱仪,以精氨酸峰面积A为纵坐标,浓度C为横坐标,制作回归标准直线。
  
  2.4发酵液中样品中精氨酸含量的测定
  
  取发酵液,稀释配制成约500μg/ml的溶液,摇匀,过滤,取25μl进样,在液相色谱仪下测量,记录峰值面积,作图。
  
  3L-甘氨酸含量的测定
  
  3.1实验仪器和试剂
  
  乙酸铵溶液;乙腈;L-甘氨酸标准样品;STI501液相色谱仪梯度系统,UV501紫外检测器,7725I手动进样阀,N2000色谱工作站。
  
  3.2HPLC色谱分析条件
  
  流动相:A为0.02%mol/L乙酸铵溶液(PH=6.5):B为乙腈,线性梯度淋洗;流速:110mL/min;柱温:30℃;进样量:20μL。
  
  梯度洗脱表3
  
  流动相时间(t/min)
  
  102030405060
  
  A(%)806040406080
  
  B(%)204060604020
  
  3.3标准直线的制作
  
  方法同2.2节
  
  3.4发酵液中样品中甘氨酸含量的测定
  
  方法同2.5节
  
  4L-甲硫氨酸含量的测定
  
  4.1实验仪器和试剂
  
  L-甲硫氨酸标准样品;甲醇;醋酸钠;STI501液相色谱仪梯度系统,UV501紫外检测器,7725I手动进样阀,N2000色谱工作站。
  
  4.2HPLC色谱分析条件
  
  流动相:A为甲醇,B为50mmol/L的醋酸钠缓冲溶液;流速1.0mL/min;梯度洗脱见表1,测定波长为262nm,柱温为30℃。
  
  梯度洗脱表4
  
  流动相时间(t/min)
  
  102030405060
  
  A(%)30508085100100
  
  B(%)7050201500
  
  4.3标准直线的制作
  
  方法同2.2节
  
  4.4发酵液中样品中甲硫氨酸含量的测定
  
  方法同2.5节
  
  5回收率实验
  
  称取甘氨酸标准液50μg/ml分别稀释0、1、2、4、6、8、10倍,每份取1ml,按标准样品处理方法,过滤,测定标准样品中的甘氨酸的含量,计算回收率。
 

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