巨细胞病毒抗体IgM（CMVAb-IgM）检测[测定方法]ELISA法[方法学原理]在微孔表面包被纯化的巨细胞病毒抗原。被稀释过的患者血清加入微孔中。如存在巨细胞病毒抗体—IgM可与微孔上抗原相结合。然后洗去未结合物质，再加入酶联液，与抗原抗体复合物结合。洗去过量【详细】

制备好DNA文库后，用标准方法将DNA电转人大肠杆菌中，得到转化株并保存，然后制备噬菌体用于分析和筛选。在液体培养基中将转化后的细胞进一步培养到对数生长期。经过在液体培养基中的增殖，一些菌液用于甘油保种，剩下的用于制备噬菌体。或者可以通过将整个转【详细】

使用与其他噬菌体展示方法相同的步骤来对制备出的文库的文库容量和多样性进行鉴定。为了在筛选后得到序列与结构的关系，应保证在噬菌粒文库中存在合理水平的过量，以确保在筛选步骤中所有克隆都能被取样，这一点是很重要的。我们通常力争让文库容量比理论上的【详细】

[器材和试剂]●ABl377型测序仪●ABI的BigDye染液●ABl9700型PCR仪器●ABI蓝色葡聚糖/EDTA上样缓冲液●3mol/L的乙酸钠●95％及70％的乙醇●0．4pmol/ul的fUSE5“超级反向”引物，或T7“超级上游”引物●一台带Qiagen2X96平板转子或同等转子的Qiagen4K15C型离心【详细】

在筛选和测序后，下一步是将单克隆的结合性用以下三种形式显示出来：首先，得自靶标器官的、相对于无插入序列的噬菌体及其他器官和组织而数量增加的噬菌体；其次，在器官或组织的脉管系统上进行免疫组化和免疫荧光染色时的阳性染色；第三，我们合成、注射以及【详细】

[器材和试剂]●PBBST（PBS，0．1％BSA，0．1％Tween-20）●磁分离仪（Dynal）●f1Rl紫外灭活噬菌体●洗脱缓冲液（用甘氨酸将0．1mol/LHCl调整到pH2．2，1mg/mlBSA）●2rn01/LTris-HClpH9．0●LB-琼脂培养基（1％细菌用胰蛋白胨，0．5％酵母提取物，1．5％细菌【详细】

[器材和试剂]●噬菌体缓冲液●XLl-Blue或者DH5。F，TB细胞●IPTG（30mg/m1储存液，水溶液；储存在-20℃）●LB-琼脂培养基+Amp/X-gal/IPTG●Luria-Bertani（LB）[L-液体培养基（1％细菌用胰蛋白胨，0，5％酵母提取物，0．085m01/LNaCl，pH7．2）]●LB+Amp（L-【详细】

[器材和试剂]●LB+Amp●LB+Amp/Glu[LB，50ug/mlAmp，l％葡萄糖]●IPTG●M13K07辅助噬菌体（Stratagene）●PEG8000（Sigma）●NaCl●TBS●SW40异质同晶聚合物管（Beckman）[方法]1．将含有单克隆噬菌粒的菌落接种到10ulLB+Amp/Glu中，37℃过夜培养（在lac启动【详细】

[器材和试剂]●直径为60mm的聚苯乙烯培养皿（Falcon1007）●包被缓冲液●单克隆抗体（mAb）57D1。该抗体能识别M13噬菌体次要衣壳蛋白（pⅢ）N末端。它是用M13噬菌体颗粒免疫大鼠而获得的。来自含57D1杂交瘤细胞的上清用50％（NH4）2SO4沉淀，然后在PBS中溶解【详细】

互补DNA（cDNA）克隆基因的表达是基因分离与鉴定的一个极为有效的工具。用于筛选的核苷酸探针需要所感兴趣基因的原始序列信息，而对于表达cDNA文库的筛选只需要一个天然的配体或一个特异的抗体（单克隆或多克隆）作为探针。体外筛选入噬菌体或质粒展示的cDNA【详细】

[器材和试剂]通用设备及试剂●灭菌水●无菌微量离心试管●无菌移液枪及移液管枪头●微型离心机●台式离心机A部分●无菌的0．2ml的细壁聚丙烯微型离心管●pfuDNA聚合酶（Stratagene）●10×pfu缓冲液，由提供PfuDNA聚合酶的厂商提供●dNTP混合液（每个10mmol/L【详细】

[器材和试剂]●PBST●牛血清蛋白（BSA）（Sigma）●抗血清及gⅥ—cDNA噬菌体文库●无菌15ml聚丙烯管（Falcon）●立式旋转机●蛋白A—琼脂糖凝胶珠（AmershamBiosciences）●无菌0．1mol/L盐酸甘氨酸，pH2．2加0．1%（w/v）BSA●无菌2mol/LTris碱（未调节pH）【详细】

[器材和试剂]●通用设备及试剂以及以下的设备和试剂：●无菌96孔带盖培养板（Costar）●LBAT●R408辅助噬菌体（Stratagene）●振荡孵育箱●96孔复制板●PEG/NaCl（●PBS[方法]1．将克隆体接种到100ulLBAT96孔培养板上，并在37℃过夜振荡培养（180r/min）。2．【详细】

总体上，可以构建两大类抗体文库：免疫文库或天然文库。免疫文库是用免疫球蛋白（Ig）可变区（V）基因制备而成的，这些基因或来自免疫人群，或来自小鼠；其中的V基因高度偏向于能识别免疫原的抗体。因而，免疫文库中分离的抗体亲和力，远高于那些分离自同等规【详细】

天然V区可以被看作是在经历过或未经历过抗原刺激的淋巴细胞中所发现的结构。结果，有些扩增的V基因将会是重排的肝系基因，而另外的则含有B细胞与抗原相遇所诱导产生的突变体。这些基因扩增所用引物可以识别V基因的5’端scFv单链抗体和J基因的3’端或者是CI。【详细】

器材和试剂]●PCR试剂和设备●1ug任何舍有scFv及（GIy4Ser）3接头的载体●RHuJH引物、RHuVκ引物和RHuVλ引物，10pmol/ul[方法]1．在0．5ml微量离心管内配制用于扩增的主混合液。所显示的主混合液用于VH—Vκ接头。对于VH—Vλ接头的主混合液，n＝29。单个反【详细】

器材和试剂]●PCR试剂和设备●Geneclear试剂盒（Qbiogene，Inc．）●V区特异性正向（JΚFOR和JΛFOR）和反向（VuBACK）PCR引物●scFv接头DNA[方法]1．在0．5ml微量离心管内配制以下PCR反应混合液。配制成2个“反应管”，1个含有V。文库DNA，另1个则含有Vl文库【详细】

[器材和试剂]●T4DNA连接酶及10×缓冲液（NEB）●酚/氯仿（Sigma）●100%和70%乙醇，-20℃保存●消化的载体和scFv文库●TE（10mmol/LTrispH8，lmmol/LEDTA）[方法]1.如下所述，配制两个100ul连接混合液，其中1个用于VH-VκscFv文库，另1个用于Vu-VλscFv文库，【详细】

[器材和试剂]●大肠杆菌TGl菌株（Stratagen）●37℃孵育箱（NewBrunswickScientmc）●SorvatlRC5离心机（或同类型），GS3转头（均在4℃预冷）●预冷的500m1聚丙烯离心管●2L有挡板锥形瓶●基本培养琼脂板[105gK2HP04、4．5gKH2P04、1g（NH4）2S04、0．5gNa3C6【详细】

YY11664琼脂糖凝胶4FFBR进分英文名称：Sepharose4FFExclusionlimit：forglobularproteins：～3×107ａndfordextrans：～6×106Meanparticlesize：90umBeadsizerange：45～165umBeadstructure：highlycross-linkedagarose,4%or6%,respectively,sphericalFlowrate【详细】