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神经生长因子（NGF）的检测
阅读：1673 发布时间：2011-12-17根据神经生长因子（nervegrowthfactor，NGF）对神经细胞的促增殖作用，可采用PCI2细胞分化试验检测其活性。PCI2细胞是大鼠的嗜铬细胞瘤细胞株，培养于含15％马血清、5％FCS的RPMI-1640培养液中，在普通培养瓶中成团悬浮生长。将培养瓶包被鼠尾胶后，PCI2可贴壁生长。
1．将PCI2置36％，7。5％C02条件下培养，每2天更换2／3培养液，待细胞接近汇合时，用含1mmol／L EGTA的上述培养液培养细胞6h或过夜，用RPMI-1640／水（1：1）洗涤细胞3次，吹打分离单个细胞，按1：4分瓶继续培养。
2．用上述培养液将PCI2细胞配成106／mL，每个35mm培养皿中加入0．5mL细胞悬液和系列稀释的NGF待测样品或标准品，设不加NGF为对照。继续培养20—24h。
3．在倒置相差显微镜下观察PCI2细胞。细胞成簇生长，计数100个细胞簇，其中细胞有纤维突起的细胞簇为阳性细胞簇，减去不加NGF对照细胞孔中的阳性细胞簇即为NGF诱导的分化细胞簇数。以分化细胞簇数对样品稀释度作图，绘制剂量-反应曲线，计算样品中NGF的含量。