一、暴露和修复抗原的原因

    在进行常规石蜡切片或存档标本的回顾性研究时，必须进行酶消化或热处理诱导抗原的修复来提高IHC检测的敏感性，使许多原来仅表达在冰冻切片上的抗原能用于石蜡切片。主要通过酶消化使抗原决定簇暴露，热诱导断裂交联、溶解变性蛋白等，有利抗原抗体结合，使IHC敏感性增加。进行抗原暴露和热诱导处理主要有下列两点原因。

 

    （一）固定液的影响

    甲醛在固定组织中所起的作用机理目前尚不十分清楚，其可能的机制是在用甲醛固定组织时，甲醛使蛋白质发生凝固，在发生凝固的过程中可引起蛋白质自身和不同的蛋白质之间通过甲基化桥使蛋白质发生交联。交联过程中可导致蛋白质的三级或四级结构的折叠方向发生改变，出现空间阻碍，同时抗原与其他分子间也会发生交联，形成网络结构而掩盖抗原决定簇。蛋白质发生交联的程度受甲醛溶液的pH值、温度和固定时间的影响。为什么有些组织间质抗原，例如纤连蛋白（fibronectin）、各型胶原和层黏连蛋白（1aminin）等，必须用胃蛋白酶处理才能获得良好的结果?而末见用热处理修复抗原的方法获得成功的报道?为什么有些抗原决定簇不受影响，不需要抗原修复?例如LCA、T细胞、B细胞、CK、EMA和波形蛋白（vimentin）等。有人认为，组织在脱水过程中对抗原性也有一定的影响，但无直接的证据。

 

    （二）抗体制备的影响

    抗体在制备过程中，尤其是单克隆抗体的制备，在筛选时一定要筛选能用于石蜡切片抗原决定簇的单克隆抗体。多克隆抗体绝大部分能用于甲醛固定的石蜡切片检测，不需要抗原修复，部分抗体仅需酶消化，这可能与多抗的抗原决定簇众多有关。但目前市售的大部分多克隆抗体均注明需高温热修复，令人比较难以接受。而单克隆抗体从理论上说是单一的抗原决定簇，虽然目前的绝大多数商品化单抗多是几株混合出售，但与多抗相比还是比较单一。这里可能就存在某些对固定液较敏感的抗原决定簇空间结构位点易改变，而某些抗原决定簇就相对较稳定。