人血管内皮生长因子VEGF说明书

人血管内皮生长因子VEGF 

本试剂仅供研究使用  标本：细胞培养上清液

一、试 剂 组 成

1、精密度微孔板Microtest Plates 96 wells            2、酶标偶合液Enzyme Conjugate   12.0ml

3、标准品Standard 　5 x 1.0ml                     4、呈色剂A、Substrate  A  6.0ml

5、呈色剂B、Substrate B  6.0ml                   6、终止液Stop Solution  6.0ml  

7、浓缩洗涤液（1：20）Rinsing Buffer 60.0ml        8、5倍样品稀释液  dilution 15.0m

二、注意事项

1.  此试剂为体外检测试剂，效期内使用，试剂应视为传染物，不同总批号的试剂不能混用。

2．  使用前应将盒内各试剂取出。室温放置至少30分钟，

3．  浓缩洗涤液出现结晶后，请于37℃孵育15分钟。

4．  浓缩样品稀释液出现结晶后，请于37℃孵育15分钟

5．  若24小时内进行实验，标本可存放于2～8℃。不需及时实验，标本-20℃保存，避免反复冻融。

6．  在冲洗微孔板过程中，务必反复清洗干净，并扣干微孔中的残余液体，否则将降低度，造成吸光度偏离的假像。

7．  加样完毕后，应注意轻微摇动微孔反应条，以便使孔中的液体充分混匀。

8．  试剂盒保存于2～8℃，请勿冷冻，有效期请见盒内标示。

三、实验前准备

1．使用前应将盒内各试剂取出，室温放置至少30分钟。

2．准备各种实验仪器及材料，如微量移液器，吸头，医用蒸馏水等

3．浓缩洗液与医用蒸馏水1︰19倍稀释后成为应用洗涤液

4．浓缩样品稀释液与医用蒸馏水1︰4倍稀释成应用样品稀释液

5．用应用样品稀释液来稀释样品，按照1：100的体积比来稀释样品如10μl的样品加入到1ml的应用样品稀释液中，充分混匀待用。）

四、操 作 步 骤

1．取出酶标板，设空白孔，依照次序对应分别加入100μl的标准品于空白微孔中（空白孔视为0号标准品，用医用蒸馏水替代）

2、分别标记样品编号，加入100μl的稀释样品于空白微孔中（不同的样本采用不同的吸头）。

3、将酶标板置于37℃温育30分钟；

4、将酶标板板取出，将其中的液体甩去，每个孔中全部加满应用洗涤液后，立即甩去液体;

5、每个孔中加满应用洗涤液后，轻微振摇酶标板30秒后将孔中的应用洗涤液甩去，在吸水纸上将酶标板拍干。

6、重复第5个步骤5次，在吸水纸上将酶标板拍干。

7、在标准品孔和样品孔中加入100μl的酶标偶合溶液。

8、将96孔板置于37℃温育30分钟。

9、将酶标板取出，将其中的液体甩去，每个孔中全部加满应用洗涤液后，立即甩去液体。

10、每个孔中再次加满洗涤应用液后，室温轻微振摇酶标板30秒后将孔中的应用洗涤液甩去，在吸水纸上将酶标板拍干。

11、重复第5个步骤5次，在吸水纸上将酶标板拍干。

12、在每个孔中加入底物A 50μl后立即加入底物B 50μl。轻轻振荡混匀。（A液、B液采用不同的吸头加样）

13、将酶标板置于37℃避光温育反应15分钟。

14、每个微孔中加入50μl的终止液，轻轻振荡混匀。

15、在酶标仪上，450nm处测定OD; 显色后，15分钟内进行测定。

16、根据制备的标准曲线，计算样本含量

五、结 果 判 断

仪器值：于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值。

检测值范围：0 – 32ng/ml                    

    敏感度： 0.2 ng/ml